[發明專利]蛋白酶水解腸粘膜工藝

在審

• 申請號: 201610138432.8
• 申請日: 2016-03-11
• 公開（公告）號: CN107177014A
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發明（設計）人: 陳文龍;張宏;宋磊
• 申請（專利權）人: 南通游龍腸衣食品有限公司
• 主分類號: C08B37/10
• 分類號: C08B37/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種蛋白酶水解腸粘膜工藝，其具體步驟如下：

將粗品肝素鈉溶于 NaCl 溶液中，機械攪拌至肝素鈉全部溶解，向溶液中加入 堿液直至產生沉淀，靜置，過濾除去不溶物，得濾液；

將步驟 (1) 中濾液以堿液調 pH 至 9．5— 11，加入 H202 溶液，在 10— 30℃

下反應 2．5— 3．5 小時，得反應液；

將步驟 (2) 得到的反應液升溫至 30— 50℃，此后每隔 2．5— 3．5 小時補加

H202 溶液，并調節 pH ；補料后共反應 15— 21h ；

向步驟 (3) 得到的反應液中加入吸附劑，磁力攪拌，過濾除不溶物，得濾液；

將步驟 (4) 中的濾液通過平衡好的凝膠色譜柱，收集低分子量的肝素鈉洗脫；

將步驟 (5) 中的低分子量的肝素鈉洗脫液用弱堿性離子交換樹脂吸附，分別 以三種濃度的 NaCl 溶液洗脫，收集第一種 ( 最低 )、第三種 ( 最高 ) 濃度的 NaCl 洗脫液并 混合；

將步驟 (6) 中的混合洗脫液，在磁力攪拌下降溫至一 5— 8℃，再用乙醇沉淀、 真空干燥得產品。

2.根據權利要求 1 所述的蛋白酶水解腸粘膜工藝，其特征在于：步驟 (1) NaCl 溶液的質量百分濃度為 1．2— 1．8％；NaCl 溶液的用量為 2— 3mL ／ g 肝素鈉粗 品量；靜置時間 1— 2 小時。

3.根據權利要求 1 所述的蛋白酶水解腸粘膜工藝，其特征在于：步驟 (1)和(2) 的堿液均為 NaOH 或 KOH 溶液 ；堿液的濃度為 1— 1．5mOl/L。

4.根據權利要求 1 所述的蛋白酶水解腸粘膜工藝，其特征在于：步驟 (2)和 (3) 中所加入的 H202 溶液和 NaCl 溶液的體積比為 3— 5 ：100 ；步驟 (2) 中 H202 溶液的濃度為 1— 5mOl/L，步驟 (3) 中 H202 溶液的濃度為 1— 3mOl/L。

5.根據權利要求 1 所述的蛋白酶水解腸粘膜工藝，其特征在于：步驟 (3) 中每次補加完 H20 溶液后測定 pH，使 pH 在 6．8— 7．5 之間。

6.根據權利要求1 所述的蛋白酶水解腸粘膜工藝，其特征在于：步驟(4) 中所述的吸附劑為活性碳、皂土或硅酸鹽；吸附劑的加入量為 3— 5g ／ 100mlNaCl 溶液量。

7.根據權利要求 1 所述的蛋白酶水解腸粘膜工藝，其特征在于：步驟 (5) 中所述的凝膠色譜柱為 Sephadex6-25，樣品層為 15— 25％柱床體積，柱的徑／高為 1 ：5— 7 ；以質量百分濃度 4—6％ NaCl 溶液平衡并洗脫，流速為一個柱床體積／ 1．5—2 小時，收

60— 90mim 時的洗脫液。

8.根據權利要求 1 所述的蛋白酶水解腸粘膜工藝，其特征在于：步驟 (6) 中三種濃度的 NaCl 溶液分別為 0．1— 0．3g/L、0．4— 0．6g/L、0．7— 0．9g/L ；其洗脫時 間均為 1．8— 2．5 小時，樣品層為 15— 25％柱床體積。

9.根據權利要求 1 所述的蛋白酶水解腸粘膜工藝，其特征在于：步驟 (6) 中所用的弱堿性離子交換樹脂是 D301、D315、D318 或 330，柱的高／徑比為 6— 8 ：1。