[發明專利]鑒別基因I型與II型鴨呼腸孤病毒的引物及方法有效
| 申請號： | 201610137900.X | 申請日： | 2016-03-10 |
| 公開（公告）號： | CN105695629B | 公開（公告）日： | 2019-02-05 |
| 發明（設計）人： | 云濤;張存;華炯鋼;葉偉成;余斌;陳柳;倪征 | 申請（專利權）人： | 浙江省農業科學院 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人： | 沈自軍 |
| 地址： | 310021 *** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 鑒別 基因 ii 型鴨呼腸孤 病毒 引物 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種用于鑒別基因I型與II型鴨呼腸孤病毒的引物，包括引物對1和引物對2，其特征在于，
引物對1為：
上游引物：5’-CTGACGCTTTTGAAGTCCACT-3’，
下游引物：5’-AACACTGTATCCTGGACCAGC-3’，
引物對2為：
上游引物：5’-CGTCTATTCTCGTTTCCCTTC-3’，
下游引物：5’-GAGAGAGAGGATAGCTCGGAC-3’。
2.一種包含如權利要求1所述引物的試劑盒。
3.如權利要求2所述的試劑盒，其特征在于，還包括陽性對照。
4.如權利要求2所述試劑盒在鑒別基因I型與II型鴨呼腸孤病毒中的應用。
5.一種鑒別基因I型與II型鴨呼腸孤病毒的方法，其特征在于，步驟如下：
(1)提取樣本基因組RNA；
(2)以提取的樣本基因組RNA為模板，以權利要求1所述引物進行RT-PCR擴增；
(3)RT-PCR產物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測，
若擴增產物大小為249bp，則樣本為基因I型鴨呼腸孤病毒，若擴增產物大小為505bp，則樣本為基因II型鴨呼腸孤病毒，
所述RT-PCR擴增為一步法RT-PCR擴增，
所述RT-PCR擴增反應體系為：
所述RT-PCR擴增反應方法為：50℃逆轉錄30min；94℃預變性2min；94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共35個循環。
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