[發明專利]一種匍枝馬尾藻無性種苗繁育的方法

在審

• 申請號: 201610137819.1
• 申請日: 2016-03-09
• 公開（公告）號: CN105746353A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 朱軍;鮑時翔;蘇醒;鄒瀟瀟;林勇
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶生物技術研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明發涉及一種匍枝馬尾藻組織培養育苗的方法，屬于海藻組織培養技術領域。

技術背景

馬尾藻(Sargassumspp.)是褐藻門(Phaephyta)的一屬，大多數為暖水性種類，廣泛分布于暖水和溫水海域。馬尾藻屬海藻具有較高的經濟價值，經加工后可提取褐藻酸、碘晶、甘露醇和高活性膳食纖維等，是重要的工業原料。馬尾藻屬海藻富含蛋白質、脂肪、氨基酸、多種維生素、鈣、鉀、鎂、錳、鋅、碘、磷和硒等營養成份及一些獨特的活性物質，如海藻多糖、藻脘酸、高度不飽和脂肪酸等，在食品、醫藥、保健和養殖生產中也極具開發潛力。另外，馬尾藻生長迅速、體型較大，不僅為魚、蝦和貝類提供了優良的棲息場所，而且具有吸收和固定水體中的碳、氮、磷等營養物質，增加水體溶解氧等優點，在海洋生態環境修復等方面也具有重要意義。

匍枝馬尾藻作為海南省廣泛分布的一類熱帶大型海藻，不僅可應用于海藻肥、褐藻膠等工業產品的提取及食品、醫藥等多個領域，產生較高的經濟價值；而且在海域生態修復方面，可在短期內形成一定規模的海藻生態系統，有效防治海水富營養化和赤潮的發生，從而改善海水養殖結構。

匍枝馬尾藻在自然海區分布廣泛，資源豐富，但是它在自然狀態下的生長受到嚴格的季節限制，生物量明顯表現出季節變化。在自然海區，匍枝馬尾藻的生長周期包括生長期、繁殖期、衰退期、休止期。從每年的8月份到次年的2月份，匍枝馬尾藻在自然海區的生長基本處于休止狀態。目前匍枝馬尾藻種苗生產主要依靠有性繁殖，但由于受到季節的影響，種苗生產受到很大的限制，很難長期大量生產幼苗。因此，如何使匍枝馬尾藻種苗的生產擺脫季節限制，成為一個亟待解決的問題。

發明內容

本發明的目的是在于提供一種采用組織培養來大量繁育匍枝馬尾藻種苗的方法，其不受季節、自然生態條件等限制，需要的外植體材料少、養殖空間少、繁殖量大，可用于增殖或人工栽培。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種采用組織培養來大量繁育匍枝馬尾藻種苗的方法，具體步驟如下。

1)選取生長良好的匍枝馬尾藻新鮮藻體，去除藻體表面的雜藻和附著物，再用滅菌過濾海水反復沖洗4-6遍。將藻體置于20-22℃，光照強度2000-4000Lx，光周期14D：10L條件下暫養。

2)選取匍枝馬尾藻樣品中完整的幼嫩側枝用70-75％酒精消毒5-10秒，然后用質量濃度0.8-1.4％的次氯酸鈉消毒處理8-15分鐘，再用滅菌海水沖洗2-4遍。將側枝的莖或葉片切段用鑷子放入事前準備好的培養液中；培養液采用PESI培養基；培養溫度為20-25℃，光照強度為1000-4000lx，光照周期的光照∶黑暗＝8-10∶16-14h。

3)培養7-10天后莖和葉片切段切口處生出數簇不定芽，培養液5-7天更換一次，培養14-16天后不定芽生成再生葉片；將再生葉片從切段上分離，誘導再生葉片處繼續再生出不定芽；以再生葉片為外植體繼續再生出不定芽，連續誘導5-6代后產生大量不定芽；培養液采用PESI培養基；培養溫度為20-25℃，光照強度為1500-4000lx，光照周期的光照∶黑暗＝8-10∶16-14h。

4)將不定芽從切段分離，離體培養20-25天，誘導不定芽再生出假根形成完整再生苗；培養液采用PESI培養基+0.1～0.5mg/L6-BA，培養溫度為24-27℃，光照強度為1500-3000lx，光照周期的光照∶黑暗＝10-12∶12-14h。

所述步驟1)中，匍枝馬尾藻樣品樣暫養培養液為滅菌過濾海水，內含0.05-0.10mol/LNaNO₃和0.01-0.05mol/LNaH₂PO₄。

所述步驟2)中，將幼嫩側枝的葉片橫切成3-5mm切段，將幼嫩側枝的莖橫切成2-5mm的切段放入事前準備好的培養液中培養。

所述步驟2)中，不定芽誘導條件是采用PESI培養基，在20-25℃，光照強度1000-4000lx，光照周期的光照∶黑暗＝8-10∶16-14h條件下在培養。

所述步驟3)中，選取5-10mm的再生葉片橫切成2-3mm切段放入事前準備好的培養液中培養。

所述步驟4)中，假根誘導條件是采用PESI培養基+0.1～0.5mg/L6-BA，在24-27℃，光照強度1500-3000lx，光照周期的光照∶黑暗＝10-12∶14-12h條件下在培養。

本發明具有如下優點：