[發(fā)明專利]一種漢遜酵母表達的重組乙肝表面抗原的分離純化方法及其應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610137254.7 | 申請日： | 2016-03-11 |
| 公開（公告）號： | CN105693826A | 公開（公告）日： | 2016-06-22 |
| 發(fā)明（設計）人： | 黃恩啟;吳常偉;李超;王力衛(wèi);劉術(shù)敏;程英杰;陶立峰;楊世龍 | 申請（專利權(quán)）人： | 安徽智飛龍科馬生物制藥有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/02 | 分類號： | C07K14/02;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16;A61K39/29;A61P31/20 |
| 代理公司： | 合肥天明專利事務所 34115 | 代理人： | 孫永剛 |
| 地址： | 230088 安*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 酵母 表達 重組 乙肝 表面抗原 分離 純化 方法 及其 應用 | ||
1.一種分離純化漢遜酵母表達的重組乙肝表面抗原的方法，其特征在于，包括以下步 驟：
1）取常規(guī)工藝發(fā)酵培養(yǎng)得到的漢遜酵母表達的重組乙肝表面抗原培養(yǎng)液，通過離心并 洗滌用于表達乙肝表面抗原的漢遜酵母細胞，然后置于高壓勻破碎直至細胞破碎率達到 90%，向破碎液中加0.05～1.0%（v/v）的表面活性劑吐溫20，調(diào)節(jié)pH值至8.5，2~8℃下攪拌4~ 16小時，得懸浮液；
2）將步驟1）制備的懸液pH值調(diào)節(jié)至8.5后，離心除去細胞碎片，調(diào)整電導率小于5.0mS/ cm，0.45μm或0.2μm微濾，然后進行陰離子交換層析，層析介質(zhì)為DEAESepheroseFF，收集 含漢遜酵母表達的重組乙肝表面抗原活性的流穿；
3）將步驟2）得到的懸液使用緩沖液稀釋2~4倍，吐溫20終濃度0.05~0.9%；
4）將步驟3）得到的稀釋液進行陽離子交換層析，所述的陽離子交換層析介質(zhì)的配基為 磺丙基或季銨鹽，上樣結(jié)束后，使用含有吐溫20終濃度0.05~0.9%的緩沖液再平衡，收集含 漢遜酵母表達的重組乙肝表面抗原活性的流穿；
5）對經(jīng)步驟4）中陽離子交換層析所得組分，采用截留分子量為100～500KD的超濾膜將 樣品一次或多次重復濃縮，直至樣品中蛋白質(zhì)濃度為1.0～2.0mg/ml；
6）將步驟5）得到的濃縮液使用凝膠過濾柱進行凝膠過濾，去除部分乙肝表面抗原病毒 樣顆粒形成的聚集物，最后得到純度大于99%以上的漢遜酵母表達的重組乙肝表面抗原。
2.一種權(quán)利要求1所述方法分離純化得到重組乙肝表面抗原在生產(chǎn)乙肝疫苗上的應 用。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于安徽智飛龍科馬生物制藥有限公司，未經(jīng)安徽智飛龍科馬生物制藥有限公司許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201610137254.7/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
