[發明專利]一種磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2聯合應用對大豆毛油進行脫膠的方法

在審

• 申請號: 201610136813.2
• 申請日: 2016-03-10
• 公開（公告）號: CN105567422A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 于殿宇;王立琦;江連洲;劉天一;張旭;張青;王文華;劉欣;齊曉芬;李中賓;王玉琦
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C11B3/00
• 分類號: C11B3/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A₂聯合應用對大豆毛油進行脫膠的方法，通過以下步驟實現：

步驟一：PLC和PLA₂的磁性固定化：首先將lg的Fe₃O₄/SiOx-g-P(GMA)復合粒子置于在50mL的磷酸緩沖液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分離后將上述浸泡后的載體加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸緩沖液(0.1M，pH6.5)中，同時在45℃下攪拌反應一段時間，最后磁分離并用磷酸緩沖液(0.1M，pH7.0)洗滌得到固定化PLC，將所得的固定化酶放置在冰箱內4℃下保存；將lg的Fe₃O₄/SiOx-g-P(GMA)納米復合粒子置于在50mL的磷酸緩沖液(0.1M，pH7.0)中浸泡24h，磁分離后將上述浸泡后的載體加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸緩沖液(0.1M，pH7.0)中，同時在45℃下攪拌反應一段時間，最后磁分離并用磷酸緩沖液(0.1M，pH7.0)洗滌得到固定化PLA₂，將所得的固定化酶放置在冰箱內4℃下保存；

步驟二：磁性固定化PLC和磁性固定化PLA₂連用脫膠：準確稱取300g大豆毛油，水浴加熱到85℃，加入一定量的質量分數為45％(w/w)檸檬酸緩沖溶劑，在該溫度下200r/min攪拌維持20min，充分攪拌混勻，然后進行冷卻，將處理后的油和2.5％的蒸餾水加入500mL反應器中，調節至一定溫度，再將油樣中加入緩沖溶液調到pH為6.0～8.0，添加一定量的磁性固定化PLC，PLC在磁性固定化酶添加量0.4～1.2g/kg，在200r/min的攪拌速度下進行酶解反應，調節反應溫度至45～65℃，酶解反應1.5～3.5h。反應結束后，用磁鐵將磁性固定化PLC分離出來；然后加入一定量的磁性固定化PLA₂，PLA₂在磁性固定化酶添加量0.06～0.14g/kg，在200r/min的攪拌速度下進行酶解反應，調節pH為6.0～8.0反應溫度至45～65℃，酶解反應1.5～3.5h，反應結束后，用磁鐵將磁性固定化PLA₂分離出來；

步驟三：測定脫膠油中的磷含量。

2.根據權利要求1所述的用磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A₂聯合應用對大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中磁性固定化酶脫膠條件進行進一步確定，PLC反應體系的pH值為6.5～7.5，磁性固定化PLC添加量0.6～1.0g/kg，反應溫度為50～60℃，反應時間2.0～3.0h。

3.根據權利要求1所述的用磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A₂聯合應用對大豆毛油脫膠的方法，其特征在于步驟二中磁性固定化酶脫膠條件進行進一步確定，磷磁性固定化PLA₂添加量0.08～0.12g/kg，PLA₂反應體系的pH值為6.5～7.5，反應溫度為50～60℃，反應時間2.0～3.0h。