[發明專利]一種牛篣苷元的制備方法

在審

• 申請號: 201610135720.8
• 申請日: 2016-03-10
• 公開（公告）號: CN105624258A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 蔣承建
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P17/04;C12N1/14;C12R1/885;C12R1/665
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 梁濤

技術領域

本發明涉及一種牛篣提取物的制備方法，具體涉及一種牛篣苷元的制備方法。

背景技術

牛蒡子苷元，化學名：(3R,4R)-[(3,4-Dimethoxyphenyl)methy]dihydro-3-[(4-hyd roxy-3-methoxyphenyl)methyl]-2(3H)-furanone，分子式：C21H24O6，分子量：372.41。 近來報到，牛蒡子苷元在抗炎，抗病毒，抗腫瘤，免疫調節等方面表現出較強的藥理活性； 同時可以作為一種新型的熱休克反應抑制調節劑，對過高溫表現的癌癥的治療有幫助作用。 此外還具有抗老年癡呆的作用和抑制K+攣縮的作用。牛蒡苷元是木脂素類化合物，主要來源 于菊科植物牛蒡(ArctiumlappaL)的果實牛蒡子。牛蒡子中主要含有牛蒡苷和牛蒡苷元。經 驗證，牛蒡苷體外在抑菌，抗病毒和抗腫瘤方面活性較弱，牛蒡苷進入體內后，在消化道中 被腸道菌轉化為苷元的脫甲基化合物，此脫甲基化合物在肝臟兒茶酚-O-甲基轉移酶的作用下 恢復為苷元，苷元被血液輸送到各個器官發揮作用，說明在抗菌抗腫瘤方面，牛蒡苷元發揮 主要作用。但是牛蒡子藥材中牛蒡苷含量大于5％，而牛蒡苷元的含量較低，僅有0.19％。

目前，已有關于牛篣苷元的制備方法的研究，如一種牛蒡子苷元的制備方法，專利號 CN101736050A和一種高純度牛蒡苷元的制備方法，專利號CN103145655A，前者采用牛蒡 子藥材中自身固有的水解酶將牛蒡苷水解成牛蒡苷元，再經硅膠柱色譜分離，溶劑重結晶法 得到牛蒡苷元結晶，后者采用石油醚對牛蒡子脫脂，再用乙酸乙酯滲漉提取，將乙酸乙酯提 取物在酸性條件下進行牛篣苷水解為牛蒡苷元，采用溶劑重結晶法和反相高效制備液相色譜 法純化得到牛蒡苷元。第一種方法利用牛膀胱自身的水解酶進行水解，第二種直接在酸性條 件下進行水解，兩者反應時間慢，水解效率低。

發明內容

本發明的目的在于，針對現有技術，提供一種牛篣苷元的制備方法。

為實現上述目的，本發明采取以下技術方案：本發明采用的發酵菌種為里氏木霉 (Trichodermareesei，CICC40932)和泡盛曲霉變種(Aspergillusawamorivar，CICC2203)；

所述的制備方法包括以下步驟：

(1)菌種活化：將處于真空干燥管內并低溫保存的菌種凍干粉取出后恢復至室溫，轉移至超 凈工作臺內，以沾有75％酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加熱外管尖端，滴數滴無菌水于 加熱處，使外管破裂，取出隔熱均勻涂布于PDA平板上，分離培養1～2d，培養溫度為28～30℃；

(2)制備種子菌液：將活化好的菌株接種于PDA平板上，置于恒溫培養箱內在28～30℃下 培養5～6d，加入無菌水至平板中晃動，沖下瓊脂表面的孢子，過濾，取得孢子懸浮液，計算 孢子濃度，并配制成孢子濃度為10⁶～10⁷個/mL的懸浮液，將孢子懸浮液按1：25的體積比置 于Mandel培養液中在28～30℃下培養1～2d即得種子菌液；

(3)牛蒡子粉的發酵炮制：將里氏木霉種子菌液和泡盛曲霉變種種子菌液按接種比為1:1～4， 接種量為1～5mL/110mL接種至發酵培養基中，在30℃下發酵培養36～168h，發酵完后向發酵 培養基中添加10mol/LNaOH至NaOH的質量分數為2％，終止發酵；

(4)牛蒡子粗提物的制備：在100℃下烘干發酵后的培養基并粉碎，將粉碎后的烘干制品置 于甲醇溶液中，并在功率80W，頻率為20kHz下超聲輻射20min，靜置8～12h后過濾并收集 濾液為牛蒡子粗提物溶液；

(5)純化：將硅膠，三氯甲烷充分溶脹后，濕法填入色譜柱，將牛蒡子粗提物溶液蒸干后溶 于三氯甲烷中，上樣，洗脫液為三氯甲烷：乙酸乙酯(v:v，10:2)，展開劑為氯仿：甲醇(v:v， 95:5)，將洗脫液濃縮干燥，將干燥物再次用硅膠柱層析純化，洗脫液改為三氯甲烷：乙酸乙 酯(v:v，6:1)，收集洗脫液，干燥結晶。