[發明專利]抗人流感嗜血桿菌P6蛋白抗體及應用該抗體的免疫層析試劑盒

有效

• 申請號: 201610129801.7
• 申請日: 2016-03-08
• 公開（公告）號: CN105585633B
• 公開（公告）日: 2019-06-21
• 發明（設計）人: 胡征;董俊;楊波
• 申請（專利權）人: 湖北工業大學;湖北華龍生物制藥有限公司
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 余曉雪;王敏鋒

本發明涉及抗人流感嗜血桿菌P6蛋白抗體及應用該抗體檢測人流感嗜血桿菌的免疫層析試劑盒，抗人流感嗜血桿菌P6蛋白抗體是分別識別人流感嗜血桿菌P6蛋白62?75位以及115?128位氨基酸所組成的兩個線性抗原表位的抗體，人流感嗜血桿菌P6蛋白在GenBank序列號是AGH02799.1；人流感嗜血桿菌P6蛋白62?75位以及115?128位的氨基酸序列分別為VLVEGNTDERGTPE及LGHDEAAYSKNRRA。本發明所提供的兩種兔抗人流感嗜血桿菌P6蛋白抗體具有特異性好、純度高、效價高、制備成本低廉的特點。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，涉及抗人流感嗜血桿菌P6蛋白抗體及應用該抗體檢測人流感嗜血桿菌的免疫層析試劑盒。

背景技術

流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae，Hi)是感染人類的一種重要的呼吸道病原微生物，該菌由波蘭細菌學家費佛博士在1892年的一次流行性感冒瘟疫中發現的，在隨后的時間里被研究者們廣泛研究。現僅知人是該病原體的宿主。免疫力較差的老人和兒童為易感人群，特別是5歲以下的嬰幼兒。Hi可引發肺炎、結膜炎、中耳炎、腦膜炎和菌血癥等，在全球每年至少有300萬嚴重病例發生，可造成患兒致殘甚至死亡。Hi分為有莢膜的a、b、c、d、e、f共6個血清型和無莢膜的不可分型流感嗜血桿菌(nontypeable Haemophilusinfluenzae，NTHi)，一度以莢膜b型Hi最為流行。目前我國開展的Hi血清學檢查大多也只針對侵襲力較強的莢膜b型。而由于該型菌株莢膜多糖疫苗的成功研發與應用，其流行已被有效控制。近來的研究多顯示，在感染Hi的患者中最常見的菌株是NTHi，其分離率已達50％以上。

臨床上由于Hi與其他呼吸道病原體引起的感染癥狀類似，因此常難以根據臨床表現、x-射線檢查等得出結論，確診往往依賴于實驗室診斷。嬰幼兒疾病的特點是起病急、轉歸快，因此敏感、快速、實用的Hi檢測對及早進行有效的臨床干預具有非常重要的意義。

盡管流感嗜血桿菌在全球范圍內傳播，但可用于實驗室診斷的標準化商品試劑的種類極少。目前，Hi感染的診斷方法有血清學檢測法，核酸檢測法和病原體直接檢測法。檢測血清中Hi IgG、IgA、IgM抗體常用的方法有：微量免疫熒光抗體檢測(MIF)，補體結合試驗(CF)，重組酶免疫測定(rEIA)，血清補體結合一酶免疫測定試驗(SeroCF—EIA)等。然而Hi抗體的檢出只能說明該個體感染過Hi，卻不能反映體內是否仍有Hi活菌存在，并且血清學特異性抗體檢測常需要根據IgM抗體的動態結果進行判斷，需要較長的時間。更重要的是，血清學檢測的主要檢測對象為抗莢膜抗體，而NTHi由于沒有莢膜，則會造成漏檢。同時，這些技術均存在靈敏度低、操作步驟復雜、需要專業人員操作、重復性差、檢測時間長、檢測特異性差、成本較高等缺陷，因而難以滿足臨床的實際需要。

核酸檢測包括核酸雜交和聚合酶鏈式反應(PCR)，核酸雜交檢測Hi的特異性強，但敏感性不高，主要用于PCR結果的檢測、判定，尚未直接用于臨床標本的檢測；PCR具有較高的敏感性，但PCR實驗對實驗室有特殊要求，標本處理、擴增和檢測要求嚴格，且易出現假陽性，在我國還不能作為常用的臨床診斷方法。

病原體檢測方法主要為病原分離培養法，將標本接種于添加了V和X因子的巧克力血瓊脂培養基上，經24小時培養后，挑取可疑菌落經形態學鑒定后，用Hi鑒定卡、Vilek一60細菌自動分析系統鑒定到種，系統自動進行生物分型。但該法存在操作步驟復雜，細胞培養時間長等明顯缺陷，并不適合臨床應用。更重要的是，其中的莢膜腫脹實驗等僅限于對有莢膜的菌株進行鑒定，而無莢膜型(NTHi)則全部漏檢。