[發明專利]一種利用水產蛋白高溫發酵制備活性肽的方法

在審

• 申請號: 201610129705.2
• 申請日: 2016-03-09
• 公開（公告）號: CN105624242A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 洪鵬志;劉喚明;周春霞;楊萍
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C07K1/34;C12R1/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種利用水產蛋白高溫發酵制備活性肽的方法，屬于水產品加工與利 用的領域。

背景技術

蛋白質酶解的后的產物小肽不但容易消化、吸收，而且還具有抗高血壓、抗膽固 醇、抗血栓形成、改善脂質代謝、增強人體體能、幫助恢復疲勞、促進鈣磷和其它微量元素的 吸收、促進大腦發育、提高記憶力、增強巨噬細胞和B細胞活力、增強免疫功能、保護表皮細 胞、防止黑色素沉淀、消除體內自由基等功效。

關于水產蛋白活性肽的制備，國內進行了大量的研究。目前，水產蛋白活性肽的制 備方法主要有自溶酶解、酶解法、液態發酵法和固態發酵與液態酶解相結合的方法這四種。 專利申請200810195646.4“內源酶制備生物活性小肽的工藝”公開了一種利用海洋低值魚 體內的內源酶自溶酶解的方法制備水產蛋白生物活性小肽的方法。專利申請 201410145196.3“一種制備扇貝裙邊活性肽的方法”公開了一種酶解法制備水產蛋白活性 肽的方法。專利申請CN102028091A“一種納豆菌發酵法制備低分子魚肽的方法”公開了一種 液體發酵法制備魚蛋白肽的方法，專利申請201210539941.3“一種由魚蛋白肽和與大豆肽 組成的蛋白肽的生產方法”公開了一種由固態發酵與液態酶解相結合制備水產蛋白活性肽 的方法。

現有的水產蛋白活性肽制備技術中存在以下缺陷。首先，現有的水產蛋白活性肽 制備技術中都有高溫處理的過程。以上制備技術中都有高溫滅酶這一工序；微生物發酵的 方法原料需要滅菌。以上這些高溫處理，會在一定程度減弱制備的功能肽或水產蛋白本身 所含功能性成分的生物學活性；另外高溫處理會顯著增強美拉德反應，使得酶解液顏色變 深，為成品加工過程增加了負擔。其次，外加酶酶解的方法需要外加蛋白酶，增加了成本；自 溶酶解由于內源酶的不足，導致酶解不徹底。另外，微生物發酵法雖然不用外加蛋白酶，但 是原料需要滅菌導致內源酶失活，不能充分地有效利用內源酶。

發明內容

針對現有的水產蛋白活性肽制備技術所存在的問題。本發明的主要目的是提供一 種低溫的制備水產蛋白活性肽的方法，以便更好地保留制備的功能肽和水產蛋白本身所含 功能性成分的生物學活性。本發明的另一目的是提供一種發酵法制備活性肽的方法，使得 微生物發酵與內源酶酶解過程能有機結合在一起。本發明還有一目的是簡化活性肽的制備 工序，降低其生產成本。

為了解決上述問題，本發明所采用的技術方案如下：一種利用水產蛋白高溫發酵 制備活性肽的方法，包括如下步驟：

（1）將斜面保藏的能產耐高溫蛋白酶的地衣芽孢桿菌（Bacilluslicheniformis）HL-3 接入到滅菌后冷卻的LB液體培養基中，于55℃、150r/min培養12h，制備成地衣芽孢桿菌 （Bacilluslicheniformis）HL-3種子液備用；

（2）將新鮮的水產蛋白絞碎后備用；

（3）將步驟（2）制得的絞碎的水產蛋白放入到發酵罐中，并向發酵罐中加入水和營養 物，混勻后得到發酵培養基；

（4）往步驟（3）獲得的發酵培養上接入步驟（1）所制備的地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）HL-3種子液；

（5）液態發酵過程的控制：發酵溫度為55℃～60℃，無菌空氣通入量為0.5vvm～ 2.5vvm，發酵罐的轉速為150rpm～350rpm，發酵時間為42h～48h；

（6）成品處理：將步驟（5）得到的發酵液進行過濾去除沉淀而得到上清液；上清液通過 截留分子量為5000道爾頓的超濾膜的超濾去除大分子蛋白質而得到透過液；透過液然后通 過截留分子量為200道爾頓的納濾膜的納濾去除氨基酸而得到濃縮液；濃縮液經過冷凍干 燥而制備得到活性肽成品。

所述步驟（1）中所用的能產耐高溫蛋白酶的地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）HL-3已于2016年1月18日保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏編號為 GDMCCNo：60003，保藏地址為廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓廣東省微生物研究所。

所述步驟（2）中的水產蛋白為羅非魚下腳料、南極磷蝦、蝦頭、扇貝裙邊、鱈魚下腳 料、魷魚下腳料、青鱗魚下腳料、青魚下腳料、鰱魚下腳料、草魚下腳料和鰹魚下腳料中的一 種。