[發明專利]一種利用水產蛋白高溫發酵制備活性肽的方法

在審

• 申請號: 201610129705.2
• 申請日: 2016-03-09
• 公開（公告）號: CN105624242A
• 公開（公告）日: 2016-06-01
• 發明（設計）人: 洪鵬志;劉喚明;周春霞;楊萍
• 申請（專利權）人: 廣東海洋大學
• 主分類號: C12P21/00
• 分類號: C12P21/00;C07K1/34;C12R1/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種利用水產蛋白高溫發酵制備活性肽的方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

（1）將斜面保藏的能產耐高溫蛋白酶的地衣芽孢桿菌（Bacilluslicheniformis）HL-3 接入到滅菌后冷卻的LB液體培養基中，于55℃、150r/min培養12h，制備成地衣芽孢桿菌 （Bacilluslicheniformis）HL-3種子液備用；

（2）將新鮮的水產蛋白絞碎后備用；

（3）將步驟（2）制得的絞碎的水產蛋白放入到發酵罐中，并向發酵罐中加入水和營養 物，混勻后得到發酵培養基；

（4）往步驟（3）獲得的發酵培養上接入步驟（1）所制備的地衣芽孢桿菌（Bacillus licheniformis）HL-3種子液；

（5）液態發酵過程的控制：發酵溫度為55℃～60℃，無菌空氣通入量為0.5vvm～ 2.5vvm，發酵罐的轉速為150rpm～350rpm，發酵時間為42h～48h；

（6）成品處理：將步驟（5）得到的發酵液進行過濾去除沉淀而得到上清液；上清液通過 截留分子量為5000道爾頓的超濾膜的超濾去除大分子蛋白質而得到透過液；透過液然后通 過截留分子量為200道爾頓的納濾膜的納濾去除氨基酸而得到濃縮液；濃縮液經過冷凍干 燥而制備得到活性肽成品。

2.根據權利要求1所述的一種利用水產蛋白高溫發酵制備活性肽的方法，其特征在于： 所述步驟（1）中所用的能產耐高溫蛋白酶的地衣芽孢桿菌（Bacilluslicheniformis）HL-3 在廣東省微生物菌種保藏中心的保藏編號為GDMCCNo：60003。

3.根據權利要求1所述的一種利用水產蛋白高溫發酵制備活性肽的方法，其特征在于： 所述步驟（2）中的水產蛋白為羅非魚下腳料、南極磷蝦、蝦頭、扇貝裙邊、鱈魚下腳料、魷魚 下腳料、青鱗魚下腳料、青魚下腳料、鰱魚下腳料、草魚下腳料和鰹魚下腳料中的一種。

4.根據權利要求1所述的一種利用水產蛋白高溫發酵制備活性肽的方法，其特征在于： 所述步驟（3）中水產蛋白的加入量以添加的水產蛋白的質量占發酵培養基總質量百分比 計，為10%～30%。

5.根據權利要求1所述的一種利用水產蛋白高溫發酵制備活性肽的方法，其特征在于： 所述步驟（3）中營養物為葡萄糖、食品級氯化鈣、食品級氯化亞鐵和食品級磷酸氫二鉀組成 的混合物。

6.根據權利要求1所述的一種利用水產蛋白高溫發酵制備活性肽的方法，其特征在于： 所述步驟（3）中的營養物的加入量以添加的營養物的質量占發酵培養基總質量百分比計， 分別為：葡萄糖0.01%～5%，食品級氯化鈣0.01%～5%，食品級氯化亞鐵0.01%～5%，食品級磷 酸氫二鉀0.01%～5%。

7.根據權利要求1所述的一種利用水產蛋白高溫發酵制備活性肽的方法，其特征在于： 所述步驟（4）中地衣芽孢桿菌（Bacilluslicheniformis）HL-3種子液的接種量以接入的種 子液的質量占發酵培養基總質量百分比計，為1%～15%。