[發明專利]一種用于預防疫苗注射后耦合性出血的維生素K1的快速檢測方法

在審

• 申請號: 201610129676.X
• 申請日: 2016-03-08
• 公開（公告）號: CN105784818A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 王城玉
• 申請（專利權）人: 中逸安科生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/30
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及電化學分析領域，特別是涉及一種用于預防疫苗注射后耦合性出血的 維生素K1的快速檢測方法。

背景技術

統計顯示，新生兒維生素K缺乏的發病率為4/萬～10/萬活產兒，多發生在農村，以 顱內出血最常見，約占60%～80%。晚發性維生素缺乏癥多于2周齡～3月齡新生兒，尤其多見 于1月齡左右的母乳喂養兒。另一方面，新生兒出生后1個月正好是接種乙肝疫苗第2劑，若 對有維生素K缺乏癥的嬰兒接種乙肝疫苗，常會出現注射部位出血不止，最后可能出現顱 內出血，治療不及時造成嬰兒死亡，相關新生兒接種乙肝疫苗后偶合晚發性維生素K缺乏病并發顱內出血的病例屢見報道。除此以外，其他疫苗的注射也有可能因為維生素K的缺乏導 致局部出血或注射部位流血，產生疫苗注射后耦合性出血。

新生兒出血癥的臨床表現多樣，且多伴發其他新生兒疾病，故部分患兒在臨床上 往往難于診斷和鑒別，因此在疫苗注射前，對于維生素K的及時檢測，對提前預防疫苗耦合 性出血具有重要意義。

維生素K1又稱凝血維生素，它的缺乏容易導致新生兒出血癥，它的傳統檢測方法 包括高效液相色譜法、紫外分光光度法、毛細管電泳法、電化學分析法等。傳統電化學分析 法的缺點，一是多采用汞電極，雖然重現性較好，但是汞蒸汽有毒，二是固體電極的富集量 和重現性較差。

發明內容

根據以上技術問題，本發明提供一種用于預防疫苗注射后耦合性出血的維生素K1 的快速檢測方法，其具體操作方法為：

（1）電極制備：所述電極采用納米二氧化鈦修飾玻碳電極，所述納米二氧化鈦修飾玻碳 電極的制備方法為，將玻碳電極用0.1~0.2μm的三氧化二鋁粉拋光，將納米二氧化鈦按照 12g/L的濃度進行配置，納米二氧化鈦粒徑為15到17nm之間，選擇超聲法對二氧化鈦溶液進 行分散30min，形成乳白色分散液，選擇15μl分散液作為最佳覆蓋量，具體方法是將15μl上 述分散液滴加在玻碳電極表面，室溫下風干，重復兩次；

（2）利用電極進行測試，制作10支修飾電極，檢測濃度為1.0ng/ml的維生素K1標準液, 得到的電流的平均值為7.597±0.14μA（n=10,RSD=1.85%），然后利用伏安法進行維生素K1 檢測；

（3）建立標準曲線：配制不同維生素K1含量的標準溶液，加入支持電解液中，通入高純 氮氣除氧，用電化學工作站對每個標準溶液進行電壓掃描，用標準溶液于-0.45V處的峰 電流值與維生素K1含量建立標準曲線，維生素K1標準品的純度為99%；

（4）樣品的制備和測定：將4ml人血樣品置7ml的塑料離心管中，高速離心10min,轉速 5000rpm，取上清液于35~40攝氏度水浴上用氮吹儀吹干，殘余用5.0mol/LNaAc-HAc緩沖液 2ml溶解，待用，將被測樣品加入支持電解液中，樣品液用氮氣純化10min,在與建立標準曲 線相同的條件下測定其于-0.45V處的峰電流值，由標準曲線得到該峰電流值對應的維生 素K1含量即為被測樣品的維生素K1含量。

所述電極為玻碳電極，所述玻碳電極基體上包覆有一層納米二氧化鈦層。

所述納米二氧化鈦層的納米二氧化鈦粒徑為15到17nm之間。

所述納米二氧化鈦層的制備方法是，將玻碳電極用0.1~0.2μm的三氧化二鋁粉拋 光，選擇超聲法對二氧化鈦進行分散30min，形成二氧化鈦分散液，選擇15μl，含納米二氧化 鈦12g/L的乳白色分散液作為最佳覆蓋量。具體方法是將15μl上述分散液均勻滴加在玻碳 電極表面，室溫下風干，重復兩次。

所述電解液濃度為5.0mol/LNaAc-HAc，所述脈沖伏安法的掃描速度為30mV/s， 富集電位為-0.45V，富集時間為100s，掃描起止電位-0.3V~-0.8V，脈沖高度0.05V，脈沖寬 度0.04s，電位階躍0.006V。

所述電化學工作站的工作特征是三電極體系，覆納米二氧化鈦玻碳電極為工作電 極，飽和甘汞電極為參比電極，鉑電極為輔助電極。

所述電極為工作電極，用于疫苗注射前血液中維生素K1含量的檢測，應用于預防 疫苗注射后由于維生素K缺乏所導致的耦合性出血癥。