[發明專利]一種制備高純度沒食子兒茶素GC的方法

有效

• 申請號: 201610129513.1
• 申請日: 2016-03-08
• 公開（公告）號: CN105693679B
• 公開（公告）日: 2017-12-29
• 發明（設計）人: 王智聰;沙躍兵;余笑波;陳怡
• 申請（專利權）人: 浙江省計量科學研究院
• 主分類號: C07D311/62
• 分類號: C07D311/62
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司33100
• 代理人: 王佳健

技術領域

本發明涉及一種制備高純度沒食子兒茶素GC的方法，尤其涉及表型兒茶素異構體化合物的高溫轉化及其單體化合物的制備、分離和純化的方法。

背景技術

茶葉中的兒茶素主要為表型兒茶素，即表沒食子兒茶素沒食子酸酯EGCG、表沒食子兒茶素EGC、表兒茶素沒食子酸酯ECG、表兒茶素EC，它們約占兒茶素總量的60~80%。其中EGCG是綠茶茶多酚中含量最高的物質，也是目前公認的茶葉中最主要的抗氧化成分。然而現有研究已經證實，表型兒茶素的異構體如沒食子兒茶素GC等（其化學結構如附圖1所示）在某些方面表現出較強的生理活性，如抗氧化和清除自由基活性等。

兒茶素單體化合物主要是從茶葉或茶葉提取物中進行提取，常用的分離純化方法有液液萃取、柱層析、中低壓柱色譜、高壓制備液相色譜和高速逆流色譜分離等。兒茶素的分離純化不乏其他方法，也常常采用兩種或多種方法聯合使用。文獻及專利中常見表沒食子兒茶素沒食子酸酯EGCG、表兒茶素沒食子酸酯ECG等的分離純化報道，但制備沒食子兒茶素GC單體化合物的方法較少。公開專利CN 102120738 A《一種非表型兒茶素單體的制備方法》，以兒茶素單體化合物為原料，經高溫加壓熱轉化和凝膠介質分離等過程制備非表型兒茶素。如以表沒食子兒茶素EGC為原料，制備得到了純度98.7%的沒食子兒茶素GC單體化合物，但該方法原料成本高；同時，在轉化過程中加入鈉鹽或鉀鹽的堿金屬，引入了無機鹽等雜質，且采用凝膠分離純化的方法，所制備的單體化合物純度較低。

鑒于沒食子兒茶素GC良好的營養保健和生理藥理作用，在茶葉及茶葉相關制品的質量控制、生產工藝的優化及其基礎功效學的研究過程中，需要高純度的沒食子兒茶素GC單體化合物。

發明內容

本發明的目的是制備沒食子兒茶素GC純度大于99%的高純單體化合物。本發明研制的高純度沒食子兒茶素GC單體化合物，可用于茶葉及其制品中相關物質含量監測的質量控制，相關物質基礎營養、保健、生理、藥理學功效的研究，以及相關物質對照品和標準物質的研制等領域。

本發明是通過如下技術方案實現的，其制備流程如附圖2所示。

步驟1.茶多酚溶液的配制

步驟1-1.茶多酚樣品的篩查

綠茶茶多酚中兒茶素的含量較高，優選綠茶茶多酚。市售綠茶茶多酚中兒茶素（總量）的含量有20%、40%、60%、80%、90%、95%、98%等諸多品種，優選兒茶素（總量）含量較高的品種。市售綠茶茶多酚中咖啡因的含量為0%~50%不等，優選咖啡因含量較低的品種。

步驟1-2.料液的配制

稱取步驟1-1優選的一定量的綠茶茶多酚樣品，加適量溶劑，攪拌超聲溶解，配制一定濃度的料液。溶劑可選擇超純水、甲醇、乙腈、乙醇等或其混合溶液，優選超純水作為溶劑；料液濃度可以配制100~1000 mg/mL，優選300 mg/mL。

步驟2.料液的高溫轉化

取適量配制的料液，于適當溫度轉化一定時間。轉化溫度可選100~150 ?C，優選130 ?C。轉化時間可選10~300 min，優選120 min。

步驟3.轉化液的快速制備液相色譜分離

步驟3-1.快速制備液相色譜分離

快速制備液相色譜可以選擇多種類型的色譜填料，如C18、C8、C4等，優選C18填料。填料粒徑可以選擇5~100 μm，優選20~40 μm的填料。快速色譜柱的尺寸規格以及填料裝填質量可以選擇多種，本發明使用裝填質量為120 g的填料。

快速制備液相色譜分離中，可以選擇多種流動相體系，如水、甲醇、乙腈、乙醇等，或其適當比例的混合液，本發明中采用甲醇-水體系。流動相中可以添加不同種類及不同含量的調節劑，如甲酸、乙酸、磷酸等，或其相應的緩沖鹽體系，本發明采用水相中添加0.1%（體積比）的乙酸。

快速制備液相色譜分離中，可以優化多種分離條件，如上樣量、流速、等度或梯度洗脫方式等。本發明采用粒徑為20~40 μm，填料質量120 g的快速制備液相色譜柱，優化的快速制備液相色譜分離條件如下：流動相A：甲醇，流動相B：含0.1%（體積比）乙酸的水溶液；流速：50 mL/min；梯度洗脫：15%A (0 min) – 20%A (5 min) – 25%A (10 min) – 30%A (25 min) – 35%A (30 min) – 50%A (40 min)；上樣量：3 mL；檢測波長：278 nm。