[發明專利]一種從牛蒡子中分離牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法

有效

• 申請號: 201610129419.6
• 申請日: 2016-03-08
• 公開（公告）號: CN105669797B
• 公開（公告）日: 2018-05-04
• 發明（設計）人: 劉睿斌;劉俊敏;周在富;張起輝;宋少輝;蘇其果;蔣蒨;林泉松;吳華;孫宗良;張育珍;鄭陽
• 申請（專利權）人: 重慶科瑞制藥（集團）有限公司
• 主分類號: C07H15/26
• 分類號: C07H15/26;C07H1/08;C07D307/33;C11B1/10
• 代理公司: 重慶博凱知識產權代理有限公司50212
• 代理人: 張先蕓,李華華

1.一種從牛蒡子中分離牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）將牛蒡子粉碎后進行CO₂超臨界萃取脫脂5~7小時，得到牛蒡子油和脫脂牛蒡子粉；CO₂超臨界萃取的工藝條件為，萃取壓力30 MPa、萃取溫度40℃、分離壓力10 MPa、分離溫度40℃、二氧化碳流量500 L/h；

2）對步驟1）得到的脫脂牛蒡子粉回流提取3~4次，采用150~300目篩過濾每次提取的提取液，合并濾液并進行濃縮，得到提取浸膏；其中，提取液為質量濃度為50~95%的水醇溶液，每次提取時所述提取液的使用質量為所述脫脂牛蒡子粉質量的5~10倍，每次提取時間為0.5~2小時；

3）采用CH₂Cl₂萃取步驟2）得到的提取浸膏2~3次，合并萃取液，得到待分離樣品；其中，所述CH₂Cl₂與所述提取浸膏的體積質量比為2~3 mL:1 g；

4）將步驟3）得到的待分離樣品濃縮，加入拌樣硅膠拌樣，進行硅膠柱色譜層析，采用梯度洗脫模式，所述梯度洗脫使用的洗脫液依次為體積比100:0、100: 2、100: 5、100: 8、100: 10和0:100的二氯甲烷-甲醇溶液，每個梯度洗脫5~8個保留體積，每1/3保留體積收集為一個餾分；其中，所述硅膠柱色譜層析中拌樣硅膠與待分離樣品的質量比為1~2:1，填料硅膠與拌樣硅膠的質量比為5~15:1；

5）對步驟4）收集得到的每一個餾分進行薄層色譜分析，用體積比為100:5的二氯甲烷-甲醇展開劑檢測牛蒡苷元、體積比為100:8的二氯甲烷-甲醇展開劑檢測牛蒡酚E、體積比為100:10的二氯甲烷-甲醇展開劑檢測牛蒡苷、體積比為100:15的二氯甲烷-甲醇展開劑檢測牛蒡酚H，合并薄層分析結果相似的餾分，分別得到牛蒡苷元餾分、牛蒡酚E餾分、牛蒡苷餾分和牛蒡酚H餾分；

6）分別對步驟5）得到的牛蒡苷元餾分和牛蒡苷餾分進行濃縮干燥，得到牛蒡苷元純品和牛蒡苷純品；

7）用醇溶解步驟5）得到的牛蒡酚E餾分，并加入拌樣硅膠拌樣，采用中低壓正相硅膠色譜進行梯度洗脫，所述梯度洗脫使用的洗脫液依次為體積比100:8、100:12和0:100的石油醚-乙酸乙酯溶液，每個梯度洗脫5~8個保留體積，對每個梯度的洗脫液用體積比為100:8的二氯甲烷-甲醇溶液作為展開劑進行薄層色譜分析，合并分析結果相似的餾分并濃縮，得到牛蒡酚E純品；其中，所述拌樣硅膠與牛蒡酚E餾分的質量比為1~2:1，所述中低壓正相硅膠色譜中填料硅膠與拌樣硅膠的質量比為6~10:1；

8）用醇溶解步驟5）得到的牛蒡酚H餾分，并加入拌樣硅膠拌樣，采用中低壓正相硅膠色譜進行梯度洗脫，所述梯度洗脫使用的洗脫液依次為體積比100:3、100:5和0:100的乙酸乙酯-甲醇溶液，每個梯度洗脫5~8個保留體積，對每個梯度的洗脫液用體積比為100:15的二氯甲烷-甲醇溶液作為展開劑進行薄層色譜分析，合并分析結果相似的餾分并濃縮，得到牛蒡酚H純品；其中，所述拌樣硅膠與牛蒡酚E餾分的質量比為1~2:1，所述中低壓正相硅膠色譜中填料硅膠與拌樣硅膠的質量比為10~20:1。

2.根據權利要求1所述從牛蒡子中分離牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，步驟1）中將牛蒡子粉碎至10目。

3.根據權利要求1所述從牛蒡子中分離牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，步驟4）中所述硅膠柱的徑高比為1:8。

4.根據權利要求1所述從牛蒡子中分離牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，分別對步驟6）得到的牛蒡苷元純品和牛蒡苷純品進行甲醇重結晶3次，得到牛蒡苷元高純品和牛蒡苷高純品。

5.根據權利要求1所述從牛蒡子中分離牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，將步驟7）所述牛蒡酚E純品上樣高效液相色譜，采用體積比為61:39的甲醇-水溶液作為流動相，流速3.0 ml/min，檢測波長280 nm，收集出峰的洗脫液，并對洗脫液進行醇重結晶，得到牛蒡酚E高純品。

6.根據權利要求1所述從牛蒡子中分離牛蒡子油、牛蒡苷、牛蒡苷元、牛蒡酚E和牛蒡酚H的方法，其特征在于，將步驟8）所述牛蒡酚H純品上樣高效液相色譜，以甲醇:水比40:60為流動相，流速為3.0 ml/min，檢測波長280 nm，收集出峰的洗脫液，并對洗脫液進行醇重結晶，得到牛蒡酚H高純品。