[發(fā)明專利]一種通過生物催化生產(chǎn)磷酸肌酸的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610128871.0
• 申請日: 2016-03-08
• 公開（公告）號: CN105671096B
• 公開（公告）日: 2019-05-07
• 發(fā)明（設計）人: 傅榮昭;張琦
• 申請（專利權）人: 邦泰生物工程(深圳)有限公司
• 主分類號: C12N9/12
• 分類號: C12N9/12;C12P13/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種通過生物催化生產(chǎn)磷酸肌酸的方法，其特征在于：以肌酸和三磷酸腺苷為底物，在肌酸激酶突變體的催化作用下生產(chǎn)磷酸肌酸，所述肌酸激酶突變體的氨基酸序列如SEQID NO：3所示，所述催化過程還需加入MgCl₂和三聚磷酸鈉。

2.根據(jù)權利要求1所述的生物催化生產(chǎn)磷酸肌酸的方法，其特征在于：所述肌酸與所述三磷酸腺苷的摩爾比為20:1。

3.根據(jù)權利要求1所述的生物催化生產(chǎn)磷酸肌酸的方法，其特征在于：所述催化過程是在pH值為7~8的緩沖溶液中進行。

4.根據(jù)權利要求3所述的生物催化生產(chǎn)磷酸肌酸的方法，其特征在于：所述緩沖溶液為Tris-HCl緩沖溶液。

5.根據(jù)權利要求1所述的生物催化生產(chǎn)磷酸肌酸的方法，其特征在于：所述肌酸激酶突變體為固定在酶固定化載體上的固定化肌酸激酶突變體。

6.根據(jù)權利要求5所述的生物催化生產(chǎn)磷酸肌酸的方法，其特征在于：所述酶固定化載體為環(huán)氧型LX-3000、二氧化硅、活性炭、玻璃珠或者大孔型聚N-氨乙基丙烯酰胺-聚乙烯。

7.根據(jù)權利要求5所述的生物催化生產(chǎn)磷酸肌酸的方法，其特征在于，所述固定化肌酸激酶突變體的加入量為0.01-0.5g/ml緩沖溶液。

8.根據(jù)權利要求5所述的生物催化生產(chǎn)磷酸肌酸的方法，其特征在于，所述固定化肌酸激酶突變體的制備方法包括以下步驟：

（1）制備洗酶緩沖液：0.02M Tris-HCl和0.001M EDTA 的混合溶液，pH值為7.0；

（2）制備PB溶液：2.0mol/L磷酸二氫鉀，pH值為7.5；

（3）用步驟（1）制備的洗酶緩沖液將所述肌酸激酶突變體稀釋至5-10mg/ml，并將得到的酶稀釋液與步驟（2）制備的PB溶液等體積混合，再加入所述酶固定化載體，于搖床中反應，所述酶固定化載體的加入量為10毫克酶/克載體；

（4）待步驟（3）反應完全后將所得反應液過濾，并用步驟（1）制備的洗酶緩沖液清洗，即得固定化肌酸激酶突變體。