[發明專利]一種三維細胞模型的構建方法在審
| 申請號： | 201610128744.0 | 申請日： | 2016-03-08 |
| 公開（公告）號： | CN105671029A | 公開（公告）日： | 2016-06-15 |
| 發明（設計）人： | 萬香波 | 申請（專利權）人： | 萬香波;范新娟 |
| 主分類號： | C12N13/00 | 分類號： | C12N13/00;C12N5/00 |
| 代理公司： | 廣州三環專利代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝傳鑫;宋靜娜 |
| 地址： | 510655 廣東省廣州*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 三維 細胞 模型 構建 方法 | ||
1.一種三維細胞模型的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)將細胞種植于含有培養基的培養皿中，然后將鐵磁性納米顆粒加入到 培養基中并混勻，培養至細胞密度達到80～90％，得到含有鐵磁性納米顆粒的細 胞；
(2)將步驟(1)所得含有鐵磁性納米顆粒的細胞重新種植于含有培養基 的培養皿中，在培養皿的上方放置與所述培養皿嵌合的磁力控制裝置，然后培 養18～36小時，即得三維細胞模型；
所述步驟(2)中的磁力控制裝置與所述培養皿嵌合設置，且所述磁力控制 裝置設有磁性體。
2.如權利要求1所述的三維細胞模型的構建方法，其特征在于，所述步驟 (2)中的培養皿為6孔培養板、12孔培養板、24孔培養板、96孔培養板或384 孔培養板；所述磁力控制裝置包括本體和設于所述本體上的磁性體，所述磁性 體在所述本體上的分布位置及所述磁性體的數量與所述培養皿上的孔相對應。
3.如權利要求1所述的三維細胞模型的構建方法，其特征在于，所述步驟 (1)中加入的鐵磁性納米顆粒的量為：每10000細胞中加入0.5～5微升的鐵磁 性納米顆粒。
4.如權利要求1所述的三維細胞模型的構建方法，其特征在于，所述鐵磁 性納米顆粒采用以下方法制備而成：
(a)取一容器，加入FeCl2和FeCl3得溶液A，所述溶液A中Fe2+/Fe3+的摩 爾比為0.75；
(b)在攪拌狀態下將氨水加入步驟(a)所得溶液A中；
(c)將含有氨水的溶液A在80℃下加熱，至出現沉淀物質，得到Fe3O4；
(d)向步驟(c)所得沉淀物質中加入含有表面活性劑的乙醇，然后再在 80℃下繼續加熱15～30min，至反應完全；所述表面活性劑為油酰肌氨酸和月桂 酰肌氨酸；
(e)用磁鐵吸住分離，然后用蒸餾水對沉淀洗滌多次，除去可溶性雜質；
(f)在60～80℃的真空環境下對洗滌后的沉淀進行過度水分，即得鐵磁性 納米顆粒。
5.如權利要求4所述的三維細胞模型的構建方法，其特征在于，所述步驟 (b)中加入的氨水與所述溶液A的體積比為2:3～2:6，所述氨水的質量百分濃 度為20～35％。
6.如權利要求4所述的三維細胞模型的構建方法，其特征在于，所述步驟 (d)中表面活性劑與Fe3O4的摩爾比為1:3～7；所述表面活性劑中，所述月桂酸 肌氨酸的摩爾含量為0～30％。
7.如權利要求4所述的三維細胞模型的構建方法，其特征在于，所述鐵磁 性納米顆粒的制備方法中還包括以下步驟：
(g)檢測步驟(f)得到的鐵磁性納米顆粒的Zeta電位，如為負電荷，將 所述鐵磁性納米顆粒中加入多聚賴氨酸，得到多聚賴氨酸修飾的Fe3O4鐵磁性納 米顆粒。
8.如權利要求4所述的三維細胞模型的構建方法，其特征在于，所述鐵磁 性納米顆粒的平均粒徑為9nm。
9.如權利要求1所述的三維細胞模型的構建方法，其特征在于，所述步驟 (1)中種植于含有培養基的培養皿中的細胞是密度為80％的二維平板培養經胰 酶消化及含血清培養基終止后重懸所得；所述步驟(2)中重新種植于含有培養 基的培養皿的細胞是步驟(1)培養后所得細胞經胰酶消化及含血清培養基終止 后重懸所得。
10.如權利要求9所述的三維細胞模型的構建方法，其特征在于，所述步 驟(1)中將細胞按照1:2～1:3的比例種植于含有培養基的培養皿中。
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