[發(fā)明專(zhuān)利]一種適用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行小麥根尖細(xì)胞周期分析的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610126581.2
• 申請(qǐng)日: 2016-03-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105784573A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 岳潔瑜;王利;談?wù)撜Z(yǔ)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 天津師范大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N15/14
• 分類(lèi)號(hào): G01N15/14;G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 天津市杰盈專(zhuān)利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

1.一種適用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行小麥根尖細(xì)胞周期分析的方法，它是利用固定好的小麥根尖樣品，制備小麥根尖組織的單細(xì)胞懸浮液，進(jìn)行熒光染色，流式細(xì)胞儀檢測(cè)，包括：

（1）小麥種子進(jìn)行浸種催芽，待根長(zhǎng)長(zhǎng)至3-5cm時(shí)，切取約0.2cm長(zhǎng)度的根尖，固定于新鮮配制的卡諾氏固定液中30min，用pH7-8的磷酸緩沖液漂洗干凈后再轉(zhuǎn)入體積比為70％的乙醇中，保存于4℃冰箱；所述的卡諾氏固定液指的是：甲醇:冰乙酸的體積比為3:l；其特征在于：

（2）將固定好的根尖樣品置入0.1－0.2％（v/v）的甘油中滲透2-3h，用pH7-8的磷酸緩沖液漂洗3次，每次10min，靜置沉淀后用移液槍吸取上層緩沖液，再浸沒(méi)于纖維素酶和果膠酶制成的混合酶液中，37℃酶解1.5-3h，使小麥根尖組織松軟；所述的纖維素酶和果膠酶的質(zhì)量濃度皆為2%，用去離子水配制；

（3）將所述步驟2）中的小麥根尖用pH7-8的磷酸緩沖液漂洗3次，每次10min，用移液槍吸取大部分上層緩沖液后，用研棒溫和研磨成單細(xì)胞懸液，過(guò)濾，收集濾液，即可獲得單細(xì)胞懸液；

（4）單細(xì)胞懸液經(jīng)3000r.p.m.離心4min，獲取的沉淀加入濃度為0.5-2μg/ml的4，6-聯(lián)脒-2-苯基吲哚染液，搖勻后避光染色10min，細(xì)胞內(nèi)DNA物質(zhì)被熒光染色，用pH7-8的磷酸緩沖液漂洗3次，每次10min；

（5）染色后單細(xì)胞懸液用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)，激發(fā)光波長(zhǎng)為340nm。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟（1）中所述小麥種子用自來(lái)水進(jìn)行浸種催芽，25℃孵育4-5d，待根長(zhǎng)長(zhǎng)至3-5cm。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟（1）-（5）中用pH7-8的磷酸緩沖液每次漂洗后，均用3000r.p.m.轉(zhuǎn)速離心4min。

4.權(quán)利要求1所述適用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行小麥根尖細(xì)胞周期分析的方法在了解細(xì)胞的增殖情況方面的應(yīng)用。