[發(fā)明專利]一種桑黃子實體抗癌活性多糖PBPP及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610124230.8
• 申請日: 2016-03-04
• 公開（公告）號: CN105777924B
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發(fā)明（設計）人: 時連根;曾鵬
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P35/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林超

本發(fā)明公開了一種桑黃子實體抗癌活性多糖PBPP及其制備方法。將桑黃子實體粉用超聲波輔助熱水提取出粗多糖，經(jīng)乙醇沉淀后，用DEAE離子交換層析分離出酸性多糖組分，然后依次用丙烯葡聚糖凝膠S?100、S?200和S?400層析純化，收集洗脫峰對應的洗脫液，減壓濃縮，冷凍真空干燥獲得所述產(chǎn)物。本發(fā)明多糖PBPP及其方法，純度均一，對正常細胞的生長無不良影響，對人宮頸癌細胞HELA和人胃癌細胞SGC?7901的生長均有明顯抑制作用，可用于抗癌產(chǎn)品的開發(fā)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及了一種多糖的制備方法，尤其是涉及了一種桑黃子實體抗癌活性多糖PBPP及其制備方法。

背景技術(shù)

多糖(polysaccharide)是由10個以上單糖通過糖苷鍵連接聚合而成的高分子碳水化合物，分別作為結(jié)構(gòu)成分、儲藏養(yǎng)分、特殊的活性成分，在自然界廣泛分布。天然活性多糖由于其獨特的藥理作用和較小的毒副作用，展現(xiàn)出廣闊的研究和應用前景。

桑黃(Phellinus baumii)是一種具有多種藥理作用的真菌子實體，因寄生于桑樹而得名。中醫(yī)認為桑黃能利五臟、軟堅、排毒、止血等，現(xiàn)代醫(yī)藥學研究發(fā)現(xiàn)桑黃具有抗癌、抗炎癥、抗氧化、降血糖、免疫調(diào)節(jié)、抗血管生成、護肝等多種藥理作用，但其藥用機理尚不清楚，這阻礙了其藥用價值的進一步提高。分離純化桑黃抗癌活性成分，對于推進桑黃藥用新產(chǎn)品開發(fā)及其價值提升等，均具有積極意義。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決背景技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種桑黃子實體抗癌活性多糖PBPP及其制備方法，采用回流提取、DEAE-Sepharose離子交換層析柱分離和Sephacryl S-100、S-200、S-400層析柱純化制備獲得桑黃子實體抗癌活性多糖PBPP。

為了達到上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

1)選取生長于桑樹上的桑黃子實體，自然晾干后，切片，于45℃烘箱中烘干至恒重，高速粉碎機粉碎后過80-100目篩，得到桑黃子實體粉；

2)采用超聲波輔助熱水法從桑黃子實體粉末中提取出粗多糖。

3)將粗多糖用乙醇進行沉淀。

4)通過DEAE-Sepharose離子交換層析柱洗脫分離，得到酸性多糖組分。

5)依次通過Sephacryl S-100層析柱、Sephacryl S-200層析柱和Sephacryl S-400層析柱純化洗脫后，收集洗脫峰的洗脫液，得到多糖組分取名為PBPP。

所述步驟2)采用超聲波輔助熱水法從桑黃子實體粉末中提取出粗多糖的具體方法為：

2.1)將烘干的桑黃子實體粉末按料液質(zhì)量體積比為0.04g/mL加入雙蒸水，超聲波處理35min后，于100℃下提取4.35h后抽濾，獲得殘渣和濾液。

2.2)殘渣再重復上述步驟2.1)一次，再次獲得殘渣和濾液。

2.3)合并步驟2.1)和步驟2.2)得到的濾液，在45℃下減壓濃縮至原體積的1/4，得到從桑黃子實體中提取出粗多糖液。

所述步驟3)用乙醇進行沉淀的具體方法為：往粗多糖液中加入無水乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇質(zhì)量濃度達到80％，置4℃冰箱過夜，10000rpm離心10min，獲得乙醇沉淀后的多糖。

所述步驟4)通過DEAE-Sepharose離子交換層析柱洗脫分離的具體方法為：將乙醇沉淀后的多糖用雙蒸水溶解配制成10mg/mL溶液，10000rpm離心10min，取上清液，過0.22μm濾膜，上DEAE-Sepharose離子交換層析柱，用0.1M NaCl溶液以2.5-3.5mL/min流速洗脫，洗脫時采用自動部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法檢測，收集有顯色反應的洗脫峰的洗脫液，于45℃下減壓濃縮，-80℃下真空冷凍干燥，得到酸性多糖組分。