[發明專利]一種桑黃子實體抗癌活性多糖PBPP及其制備方法

有效

• 申請號: 201610124230.8
• 申請日: 2016-03-04
• 公開（公告）號: CN105777924B
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 時連根;曾鵬
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P35/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林超

1.一種桑黃子實體抗癌活性多糖PBPP的制備方法，其特征在于：

1)選取生長于桑樹上的桑黃子實體，自然晾干后，切片，于45℃烘箱中烘干至恒重，粉碎機粉碎后過80-100目篩，得到桑黃子實體粉末；

2)采用超聲波輔助熱水法從桑黃子實體粉末中提取出粗多糖；

3)將粗多糖用乙醇進行沉淀；

4)通過DEAE-Sepharose離子交換層析柱洗脫分離，得到酸性多糖組分；

5)依次通過Sephacryl S-100層析柱、Sephacryl S-200層析柱和Sephacryl S-400層析柱純化洗脫后，收集洗脫峰的洗脫液，得到多糖組分取名為PBPP；

所述步驟2)采用超聲波輔助熱水法從桑黃子實體粉末中提取出粗多糖的具體方法為：

2.1)將烘干的桑黃子實體粉末按料液質量體積比為0.04g/mL加入雙蒸水，超聲波處理35min后，于100℃下提取4.35h后抽濾，獲得殘渣和濾液；

2.2)殘渣再重復上述步驟2.1)一次，再次獲得殘渣和濾液；

2.3)合并步驟2.1)和步驟2.2)得到的濾液，在45℃下減壓濃縮至原體積的1/4，得到粗多糖液；

所述步驟3)用乙醇進行沉淀的具體方法為：往粗多糖液中加入無水乙醇，邊加邊攪拌，至乙醇質量濃度達到80％，置4℃冰箱過夜，10000rpm離心10min，獲得乙醇沉淀后的多糖；

所述步驟4)通過DEAE-Sepharose離子交換層析柱洗脫分離的具體方法為：將乙醇沉淀后的多糖用雙蒸水溶解配制成10mg/mL溶液，10000rpm離心10min，取上清液，過0.22μm濾膜，上DEAE-Sepharose離子交換層析柱，用0.1M的NaCl溶液以2.5-3.5mL/min流速洗脫，洗脫時采用自動部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法檢測，收集有顯色反應的洗脫峰的洗脫液，于45℃下減壓濃縮，-80℃下真空冷凍干燥，得到酸性多糖組分；

所述步驟5)通過Sephacryl S-100層析柱純化的具體方法為：將酸性多糖組分用雙蒸水溶解配制成5mg/mL溶液，過0.22μm濾膜，上Sephacryl S-100層析柱，用雙蒸水以0.5-0.7mL/min流速洗脫，洗脫時用自動部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法檢測，收集有顯色反應的洗脫峰的洗脫液，于45℃下減壓濃縮成濃度為5mg/mL的多糖溶液；

所述步驟5)通過Sephacryl S-200層析柱純化的具體方法為：將所述通過SephacrylS-100層析柱純化后的多糖溶液，上Sephacryl S-200層析柱，用雙蒸水以0.3-0.5mL/min流速洗脫，洗脫時用自動部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法檢測，收集有顯色反應的洗脫峰的洗脫液，于45℃下減壓濃縮成濃度為5mg/mL的多糖溶液；

所述步驟5)通過Sephacryl S-400層析柱分離純化的具體方法為：將所述通過Sephacryl S-200層析柱純化后的多糖溶液，上Sephacryl S-400層析柱，用雙蒸水以0.3-0.5mL/min流速洗脫，洗脫時用自動部分收集器收集，再用苯酚-硫酸法檢測，收集有顯色反應的洗脫峰的洗脫液，于45℃下減壓濃縮，-80℃下真空冷凍干燥，得到高純度的多糖組分，取名為PBPP。

2.一種桑黃子實體抗癌活性多糖PBPP，其特征在于：為采用權利要求1所述方法制備獲得的多糖PBPP。