[發(fā)明專利]細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答檢驗(yàn)及其試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610124097.6
• 申請(qǐng)日: 2008-03-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105717306A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: A·J·雷德福;S·L·瓊斯;J·L·霍華德
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 賽樂(lè)思迪斯有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68
• 代理公司: 中國(guó)國(guó)際貿(mào)易促進(jìn)委員會(huì)專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 李程達(dá)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明主要涉及用于診斷、監(jiān)視或治療的方法和試劑盒，其測(cè)量針對(duì)體外試劑(原 文為“agentinvitro”，也可稱為“體外因子”)的細(xì)胞應(yīng)答性。具體地，本發(fā)明提供用于測(cè) 量從受試者收集的小樣品全血中的針對(duì)抗原的細(xì)胞介導(dǎo)的免疫(CMI)應(yīng)答的系統(tǒng)。該方法 和試劑盒將在全血樣品分析中找到廣闊應(yīng)用，所述全血樣品具有包括來(lái)自嬰兒和兒童或其 它受試者的一系列不同體積，其中所述樣品體積是受限的或其中需要小樣品體積。

背景技術(shù)

本說(shuō)明書(shū)中作者引用的出版物的參考書(shū)目集中在說(shuō)明書(shū)的末尾。

本說(shuō)明書(shū)對(duì)任何之前出版物(或從其衍生的信息)，或任何已知的事物的引用，不 是并且也不應(yīng)該看作是之前出版物(或從其衍生的信息)，或公知常識(shí)的已知事物形成為本 說(shuō)明書(shū)涉及到努力方面的承認(rèn)或供認(rèn)或任何形式的暗示。

免疫應(yīng)答的功能在于消除入侵的病原體或毒素。在某些情況下免疫應(yīng)答對(duì)有機(jī)體 是非常破壞性的，并且存活依賴于免疫系統(tǒng)從非自體區(qū)分自體的能力。例如當(dāng)免疫系統(tǒng)對(duì) 自體過(guò)度應(yīng)答時(shí)產(chǎn)生自體免疫疾病。某些免疫應(yīng)答針對(duì)相對(duì)無(wú)害的非自體分子。例如哮喘 和枯草熱，涉及對(duì)非自體的免疫應(yīng)答，其中所述免疫應(yīng)答比病原因子(causativeagent)更 衰弱。通常，先天的免疫系統(tǒng)篩選出針對(duì)非病原性有機(jī)體的應(yīng)答，并且有助于防止針對(duì)此類 無(wú)害試劑的適應(yīng)性免疫應(yīng)答。

適應(yīng)性免疫應(yīng)答由淋巴細(xì)胞例如執(zhí)行抗體應(yīng)答的B淋巴細(xì)胞或執(zhí)行細(xì)胞介導(dǎo)的應(yīng) 答的T淋巴細(xì)胞來(lái)執(zhí)行。B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生有助于使病原體和毒素失活的免疫球蛋白。T細(xì)胞直 接與呈遞于宿主細(xì)胞表面上的非自體分子(抗原)反應(yīng)，其與提供“自體”分子指令系統(tǒng)的主 要組織相容性(MHC)分子有關(guān)。在兩種情況下，產(chǎn)生對(duì)非自體分子的特定表位特異的細(xì)胞應(yīng) 答，并提供免疫應(yīng)答網(wǎng)絡(luò)和免疫效應(yīng)子分子。

因此，用于診斷或監(jiān)視感染或評(píng)價(jià)受試者建立(mount)針對(duì)非自體的免疫應(yīng)答的 能力的一種方法為確定受試者是否已經(jīng)建立了針對(duì)抗原刺激的免疫應(yīng)答。由于T細(xì)胞應(yīng)答 包括產(chǎn)生效應(yīng)子T細(xì)胞，所述效應(yīng)子T細(xì)胞能夠?qū)乖瓚?yīng)答或能夠被刺激來(lái)通過(guò)產(chǎn)生免疫效 應(yīng)子分子對(duì)抗原應(yīng)答，可以在體外測(cè)定應(yīng)答于特定抗原的這些分子的產(chǎn)生，作為細(xì)胞介導(dǎo) 的免疫應(yīng)答的測(cè)定。然而，由于非自體抗原性分子通過(guò)抗原呈遞細(xì)胞呈遞至T細(xì)胞，存在復(fù) 雜的和必須在體外成功地發(fā)生的細(xì)胞與分子的相互作用以產(chǎn)生用于檢測(cè)的充分的免疫效 應(yīng)子分子。

用于檢測(cè)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答的大多數(shù)體外方法包括使用各種分離技術(shù)從全血 中純化外周血單核細(xì)胞。此類檢驗(yàn)包括鉻釋放檢驗(yàn)、細(xì)胞毒性檢驗(yàn)、MHCI類四聚體檢驗(yàn)、用 于IFN-γ或其它細(xì)胞因子的檢驗(yàn)，其中ELISPOT提供良好的實(shí)例。ELISPOT方法固定抗原呈 遞細(xì)胞，并且已經(jīng)用于檢測(cè)應(yīng)答于抗原性刺激產(chǎn)生特定細(xì)胞因子的T細(xì)胞的數(shù)量。

如果使用全血，通常將其稀釋于培養(yǎng)基中以稀釋紅細(xì)胞，這被認(rèn)為降低該檢驗(yàn)的 敏感性。使用未稀釋全血的管內(nèi)細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答檢驗(yàn)描述于國(guó)際公開(kāi)No.W02004/ 042396，申請(qǐng)人為CellestisLimited，在此將其全文引入以作參考。國(guó)際公開(kāi)No.W02004/ 042396公開(kāi)了使用血液收集管以用于樣品與抗原和簡(jiǎn)單糖一起孵育，并且使用該試管系統(tǒng) 與其中將血液轉(zhuǎn)移到24-孔微量滴定板并在24-孔微量滴定板中孵育的檢驗(yàn)相比，顯示增強(qiáng) 的敏感性。

對(duì)于人類和牲畜動(dòng)物中的全血檢驗(yàn)而言，至少?gòu)氖茉囌咧腥?毫升血液，以提供充 足的材料來(lái)進(jìn)行細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答檢驗(yàn)。通常通過(guò)靜脈血取樣、借助于經(jīng)常在真空下的 用針刺入收集血管來(lái)取該量。

檢測(cè)免疫效應(yīng)子分子的各種方法，例如酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)(ELISA)、放射免疫檢驗(yàn) (RIA)、或血細(xì)胞計(jì)數(shù)法可以使用小體積，然而，對(duì)于進(jìn)行體外細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答檢驗(yàn)的 抗原性刺激階段的改進(jìn)系統(tǒng)，在本領(lǐng)域存在需要。具體地，需要允許以小體積血液進(jìn)行的全 血測(cè)試的方法，例如通過(guò)外周毛細(xì)血管取樣獲得的那些。篩選小樣品血液的能力將極大地 便利兒童或其它血液可能受到限制或難于獲得的受試者的取樣，并且允許無(wú)需靜脈采血的 血液取樣，其通過(guò)使用毛細(xì)血管血例如通過(guò)拇指、足跟、耳垂或其它方便位點(diǎn)的點(diǎn)刺測(cè)試 (pricktest)獲得的那些，并且用于測(cè)試在單次小容量抽血中(singleblooddrawof lowvolume)的包括有絲分裂原和半抗原刺激物的多種或一系列抗原。

發(fā)明內(nèi)容