[發明專利]一種金魚藻組織培養與快速繁殖方法

在審

• 申請號: 201610123366.7
• 申請日: 2016-03-06
• 公開（公告）號: CN105638481A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 水生藻安生物科技（武漢）有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

技術領域

本發明屬于植物組織培養技術領域，具體涉及沉水植物金魚藻的組培和快速繁殖 方法，該方法是利用完全無菌和嚴格的控溫措施，實現了沉水植物金魚藻在實驗室大量生 產，并可以推廣到生態環境修復。

背景技術

金魚藻屬于金魚藻科金魚藻屬，在湖泊生態修復工程中作為凈水工具種和植被恢 復先鋒物種、魚蝦蟹塘養殖過程中作為餌料、避難和產卵場所，以及室內觀賞水族養殖過程 中作為布景材料。目前尚缺乏成熟技術，可以大規模擴繁金魚藻優質工程苗，同時克服該物 種在自然環境中種源有限且污染嚴重的問題。

發明內容

本發明提供了一種金魚藻組織培養與快速繁殖方法，該方法是在無菌條件下，采 取控溫措施，給予固定光照，培養無菌苗體系，可常年提供大量無菌幼苗。方法易行，操作方 便，產量高。

為了達到上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種金魚藻組織培養與快速繁殖方法，包括以下步驟：

A、外植體選擇與預處理：選擇生長健壯，顏色鮮綠，無病蟲害的可萌發腋芽的金魚藻莖 段作為外植體，然后用洗滌劑浸泡，無菌水清洗進行預處理；

B、外植體滅菌：

用酒精和植物組織抗菌劑處理外植體，制備無菌外植體；

C、芽誘導：選擇0.50mg/L6-BA和1.30mg/LIAA的MS固體培養基，蔗糖質量體積濃度 為3%，pH調至5.8-6.0，固體培養基裝于50毫升三角瓶中，每瓶20毫升；固體培養基經過120 ℃滅菌處理20min，冷卻后，接入滅菌處理后的1-1.5cm的金魚藻外植體，于光照培養箱中靜 置培養，待幼芽長至1.0-1.5cm進行增殖培養；

D、增殖培養：選擇蔗糖質量體積濃度1.5%的1/2MS液體培養基，添加0.5-2.00mg/L 6-BA和0.01-1.00mg/LIAA的激素；液體培養基分裝于200毫升三角瓶中，每瓶100毫升，培 養基滅菌方式與芽誘導相同，接入長1.0-1.5cm的幼芽置于光照培養箱中靜置，進行增殖培 養；

E、煉苗和移栽：待金魚藻無菌苗長至4.0cm即可煉苗，打開瓶蓋，室溫下煉苗1-2d后洗 凈培養基，取出試管苗，移栽至自然水體中；

所述的步驟C，D，E均采用無菌環境，光照60-70μE/（m²·s），光照周期為12h/d，室內溫 度（25±2）℃。

所述步驟A中，預處理的具體步驟如下：用堿性洗滌劑浸泡30min，再用自來水沖洗 1小時，用蒸餾水反復沖洗4-5次，用無菌水再反復清洗4-5次，置于無菌操作臺。

所述步驟B中，在無菌操作臺上首先用75%乙醇浸泡15秒，用無菌水沖洗4-5次，再 用5%植物組培抗菌劑PPM進行表面消毒5min，無菌水沖洗4-5次，在無菌濾紙上將水吸干，待 用。

本發明具有以下優點：

目前關于金魚藻組織培養的技術未見報道，也沒有系統的對金魚藻作出研究。但是金 魚藻是污染水體中最后堅守的水生植物，水體污染的后期，幾乎只剩下金魚藻，可見金魚藻 的耐污能力較強，因此獲得足夠的金魚藻可以為水環境修復提供源源不斷的種苗。該技術 能直接誘導金魚藻幼芽的生長，不斷產生叢生芽，而且在液體環境中才能更好實現金魚藻 無菌苗的增殖培養。金魚藻一年四季均可生長，但是冬季生長會變得遲緩，高溫也會導致生 長緩慢，利用本發明可以不受季節、溫度、地域影響，獲得大量的無菌苗。一個為長1.5cm的 外植體經過一個月的培養可以繁殖出3-9cm長的幼苗，30d的增殖系數最高可達到18倍，一 年一個芽理論上可繁殖十億棵以上幼苗，遠遠優越于自然水體植物的繁殖速度。以一個芽 30d繼代一次，每次的繁殖系數為18計算，預期結果如下表1所示。

表1