[發明專利]一種羅漢果苷V含量≥95％的羅漢果提取物的制備方法

在審

• 申請號: 201610121910.4
• 申請日: 2016-03-03
• 公開（公告）號: CN105713061A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 張寶堂;譚家忠;李芳
• 申請（專利權）人: 湖南綠蔓生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07J17/00
• 分類號: C07J17/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明涉及植物有效成分分離提取技術領域，更具體涉及一種羅漢果苷V含量≥95％的羅漢果提取物的制備方法。

背景技術

羅漢果皂苷是葫蘆素烷三萜類皂苷，羅漢果醇是羅漢果皂苷中各個成分的苷元。現已從羅漢果中分離得到皂苷類成分有：羅漢果苷V、羅漢果苷IV、羅漢果苷III、羅漢果苷IIE、羅漢果苷IIIE、羅漢果苷VI(羅漢果新苷)、羅漢果苷A、賽門苷I、11-O-羅漢果苷V、20-羥基-11-O-羅漢果苷IA等物質。其中羅漢果苷V是主要的甜味成分，具有穩定性好、甜度高、卡路里幾乎為零的特點，可作為一種天然的食品添加劑。

公開號為CN1706861A的中國專利文件中介紹有一種高純度羅漢果甜苷V的制備方法：先將羅漢果粉碎，用乙醇加熱回流提取，再將提取物用D101型大孔樹柱分離，先用去離子水和乙醇分別洗脫至無色，再收集其洗脫液，減壓濃縮至浸膏狀，然后用正相硅膠柱分離，加入氯仿、甲醇、水為洗脫劑，收集洗脫液，減壓濃縮，再用反相硅膠C18柱分離，減壓濃縮，即可分別得到純度在90％～98％的羅漢果甜苷V。

公開號為CN101029071A的中國專利文件介紹了一種從羅漢果中制備高純度羅漢果苷V的方法：先將羅漢果粉碎成粗粉，加入乙醇回流提取，制得浸膏后用水溶解，再用乙酸乙酯萃取1次-3次，回收乙酸乙酯母液后繼用正丁醇萃取1次-3次母液，回收正丁醇后通過聚酰胺柱，水洗液濃縮后過硅膠柱層析，用氯仿-甲醇-水洗脫，收集得羅漢果苷V粗品；然后過C18反相硅膠柱層析，水洗，乙醇洗脫，收集純度大于95％以上的羅漢果苷V。

公開號為CN102675399A的中國專利文件提供一種從羅漢果中提取羅漢果苷V的方法，步驟如下：將干羅漢果進行破殼壓碎處理，并將干羅漢果、50％乙醇70℃回流提取4h，濃縮至無乙醇味后用等體積乙酸乙酯進行萃取，將乙酸乙酯溶液濃縮干燥加水溶解，上AB-8大孔吸附樹脂柱，使用乙醇濃度為20-60％，梯度洗脫，收集60％乙醇的洗脫液濃縮到一定體積后，加入丙酮溶液至終濃度為50％左右，室溫過夜結晶和重結晶，得羅漢果苷V純品含量98％。

公開號為CN104530168A的中國專利文件提供了一種用制備液相純化羅漢果苷V的方法，方法如下：提取將羅漢果苷溶液泵入動態軸向壓縮柱制備色譜系統，柱內填料為反相球形硅膠，上樣量為0.1％～3％，柱內流動相為有機溶劑水溶液，先控制有機溶液水溶液的初始梯度為2∶8～4∶6，流速100ml/min，洗脫30min～50min；調整梯度≥1，繼續洗脫至50min～60min，調整紫外光度檢測器的檢測波長為203nm，自流動相開始注入動態軸向壓縮柱制備色譜系統起進行液相色譜檢測，在線收集對應色譜峰的洗脫液，得到純度大于95％的羅漢果苷V。

公開號為CN104892717A的中國專利文件描述了一種羅漢果甜苷V的工業級制備液相色譜分離方法，取羅漢果粗制品，以固液比1:10～20加入甲醇進行溶解，過濾，將濾液離心，超濾，再將超濾液注入動態軸向壓縮制備液相色譜系統，然后用洗脫劑進行洗脫，收集目標段洗脫液，干燥，得產品羅漢果甜苷V純度≥95％。

公開號為CN1101407535A的中國專利文件描述了一種用30-60％的羅漢果苷V為原料制備98％含量的羅漢果苷V的方法，步驟如下：將30-60％苷V溶于甲醇過濾，濾液用丙酮沉淀，沉淀用硅膠柱層析吸附，用乙酸乙酯、乙酸丁酯之類的低碳鏈脂與乙醇的混合溶液洗脫，用丙酮和甲醇的混合溶液結晶得98％以上羅漢果苷V。

現有的90％以上含量的羅漢果苷V制備方法有相當大的局限性，用制備級的液相色譜分離純化雖然簡單，但對設備要求相當高，且分離量少成本大，用C18反相柱層析類似于制備液相色譜；C18反相硅膠昂貴，成本相當高；而溶劑萃取丙酮結晶等方法操作工藝復雜，用到有毒和管制的有機溶劑如丙酮、氯仿等，對生產條件要求很高，無法規模化生產。因此需要開發出工藝簡單，設備要求低，并且成本低的新工藝方法。

發明內容

(一)要解決的技術問題

本發明要解決的技術問題就是在制備羅漢果提取物中，如何只使用無毒或者低毒非管制溶劑，降低成本，降低對設備要求，并適合于工業化生產，從而提供一種羅漢果提取物的制備方法。

(二)技術方案

為了解決上述技術問題，本發明提供了一種羅漢果提取物的制備方法，該方法包括如下步驟：

步驟一：挑選羅漢果，水洗去除臟污，擠壓破碎，按照原料重量kg比蒸餾水體積L為1:3向原料中加入蒸餾水，加熱使沸騰，提取0.5～1.5小時，提取3次，合并提取液；