[發明專利]一種基于金/二硫化鉬/石墨烯納米復合材料的適體傳感器對溶菌酶的靈敏測定方法

有效

• 申請號: 201610120926.3
• 申請日: 2016-03-03
• 公開（公告）號: CN105784796B
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 王宗花;鹿林;桂日軍;張菲菲;金輝
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 張勇

本發明公開了一種基于金/二硫化鉬/石墨烯納米復合材料的適體傳感器對溶菌酶的靈敏測定方法。通過制備二硫化鉬/石墨烯和金納米顆粒的復合材料，構建了金納米顆粒/二硫化鉬/石墨烯適體傳感器，并且基于適體識別的“signal?on”模式，建立了靈敏檢測溶菌酶的新方法。溶菌酶的線性檢測范圍為10^?14?10^?8M，最低檢測限為6.9×10^?15M。實際樣品的測定結果表明，該方法具有很好的適用性。

技術領域

本發明涉及電化學檢測技術領域，具體涉及一種基于金/二硫化鉬/石墨烯納米復合材料的適體傳感器對溶菌酶的靈敏測定方法。

背景技術

溶菌酶(lysozyme),又稱胞壁質酶或N-乙酰胞壁質聚糖水解酶(N-acetylmuramide glycanohydrlase)，是一類專門水解微生物細胞壁的酶的總稱，因其具有溶菌的生化特性而得名。溶菌酶可溶于水，水溶液澄清透明，不溶于有機溶劑。其分布廣泛，存在于各類生物的不同組織中。它能夠選擇性地溶解微生物的細胞壁，因而在醫療上可用來抗菌、消炎和預防傷口感染，并且對其他組織器官無影響，是一種對生物體本身沒有毒副作用的蛋白質。另外，在食品領域溶菌酶還可以用來防腐保鮮，在畜牧業中可以增強家養動物的抗病力。

溶菌酶在人類血清和尿液中的濃度異常與許多疾病相關，如癌癥、艾滋病和骨髓白血病。由于溶菌酶重要的生理特性，開發新的、快速、有效的方法對溶菌酶的檢測具有重要意義。到目前為止，報道了許多檢測溶菌酶的方法，如電化學、表面增強拉曼光譜、比色法、熒光等方法。其中，電化學適體傳感器檢測溶菌酶的方法引起了廣泛的研究興趣。

電化學傳感技術具有檢測成本低、分析速度快、靈敏度高、操作方便、易于實現自動化和實時監測等顯著優點。電化學適體傳感器是以核酸適體作為分子識別元件，根據適體與目標分析物配體結合前后電化學信號的變化來進行分析檢測的電化學生物傳感器。適體識別元件與各種電化學轉換器的組合選擇配用，決定著電化學適體傳感器對目標物檢測的選擇專一性、靈敏性和檢測精度。電極材料的選擇，對于提高傳感器的靈敏度至關重要。

現有技術已經公開了多種針對溶菌酶的電化學適體傳感器及其檢測方法。如郭等(Y.J.Guo,Y.J.Han,Y.X.Guo,C.Dong,Biosens.Bioelectron.,2013,45,95-101)報道了采用具有電化學活性的染料(橙II)修飾石墨烯，制備了石墨烯橙II復合納米片的免標記適體傳感平臺，檢測溶菌酶的線性范圍是5.0×10^-12-7.0×10^-10M，檢出限為1.0×10^-12M。陳等(Z.B.Chen,J.X.Guo,J.Li,L.Guo,RSC Adv.,2013,3,14385-14389)構建基于金納米晶體放大的電化學適體傳感器檢測溶菌酶，線性范圍1×10^-13M-1×10^-8M，檢測限為1×10^-13M。

雖然現有技術已經公開了多種電化學適體傳感器及相應檢測方法，但對于溶菌酶的檢測，如何提高其檢測靈敏度，仍是本領域技術人員的關注熱點。

發明內容

在現有技術的基礎上，發明人通過研究，制備了二硫化鉬/石墨烯和金納米顆粒的復合材料，構建了金納米顆粒/二硫化鉬/石墨烯適體傳感器，并且基于適體識別的“signal-on”模式，建立了靈敏檢測溶菌酶的新方法。二硫化鉬/石墨烯復合材料擁有較高的比表面積和較好的生物相容性，金納米顆粒與二硫化鉬/石墨烯通過金硫鍵自組裝結合，形成金納米顆粒/二硫化鉬/石墨烯復合材料，構建的金納米顆粒/二硫化鉬/石墨烯的適體傳感器在溶菌酶的檢測中表現出優良的電化學性能。

具體的，本發明涉及以下技術方案：

首先，本發明提供一種溶菌酶電化學適體傳感器的制備方法，包括如下步驟：