[發明專利]一種基于金/二硫化鉬/石墨烯納米復合材料的適體傳感器對溶菌酶的靈敏測定方法

有效

• 申請號: 201610120926.3
• 申請日: 2016-03-03
• 公開（公告）號: CN105784796B
• 公開（公告）日: 2018-07-24
• 發明（設計）人: 王宗花;鹿林;桂日軍;張菲菲;金輝
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 張勇

1.一種溶菌酶電化學適體傳感器的制備方法，包括如下步驟：

1）采用L-半胱氨酸法制備二硫化鉬/石墨烯（MoS₂/GR）；

2）制備金納米（AuNPs）顆粒，粒徑為10-13nm；

所述金納米（AuNPs）顆粒的制備：100mL 0.01％氯金酸溶液在105℃煮沸，劇烈攪拌，快速加入2.5mL的1％檸檬酸三鈉的溶液，持續攪拌30min，冷卻至室溫，制備的金納米粒子其粒徑為10-13nm；

3）制備金納米顆粒/二硫化鉬/石墨烯（AuNPs/MoS₂/GR）復合溶液：將1mg MoS₂/GR分散在1mL超純水中，超聲30min，接著加入1mL制備的AuNPs后避光震蕩30min，制得AuNPs/MoS₂/GR復合材料溶液；

4）溶菌酶報告探針-適體雙鏈（DNA duplex）的制備：亞甲基藍（MB）修飾的溶菌酶報告探針（P-MB）：5’-SH-C6-GTG CAG AGC TAA GTA ACT CTG CAC-MB-3’與溶菌酶適體（A-Lys）：5’-ATC AGG GCT AAA GAG TGC AGA GTT ACT TAG-3’組裝成雙鏈DNA duplex；

5）適體傳感器的制備：

玻碳電極預處理后，將制備的AuNPs/MoS₂/GR復合材料溶液滴涂在玻碳電極（GCE）表面，避光晾干，制得AuNPs/MoS₂/GR/GCE；

將制備的AuNPs/MoS₂/GR/GCE電極浸在溶菌酶報告探針-適體雙鏈溶液中，培育制得溶菌酶電化學適體傳感器。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4）中，溶菌酶報告探針溶解在100mM PBS中并暗處理1h打開二硫鍵，然后將10μM溶菌酶報告探針加入到10μM溶菌酶適體溶液中，稀釋所得溶液至濃度為1μM后加熱至90℃并持續5min，溫度降至室溫后在37℃下培育2h使雙鏈形成。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟5）中，玻碳電極的預處理為：將在金相砂紙上打磨后的裸玻碳電極用0.3μm的Al₂O₃粉打磨成鏡面，二次水清洗后，相繼在二次水和乙醇溶液中超聲30s；將清洗干凈的電極在0.5mol/L的硫酸溶液中循環伏安至穩定，二次水沖洗干凈后，室溫晾干或用氮氣吹干。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟5）中，AuNPs/MoS₂/GR/GCE的制備過程為：取7.00μLAuNPs/MoS₂/GR復合材料溶液，滴涂在電極表面，避光晾干，制得AuNPs/MoS₂/GR/GCE。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟5）中，AuNPs/MoS₂/GR/GCE電極在溶菌酶報告探針-適體雙鏈溶液中培育后用清洗液

清洗修飾后的電極，用1mM 6-巰基-1-己醇封閉電極，避光放置1h，將電極再次用二次水和清洗液清洗，制得溶菌酶電化學適體傳感器。

6.根據權利要求1-5任一項制備方法制得的溶菌酶電化學適體傳感器。

7.一種利用權利要求6所述溶菌酶電化學適體傳感器檢測溶菌酶的方法，包括：

1）將傳感器在溶菌酶溶液中37℃培育70-90min，然后浸泡在100mM PBS+140mM NaCl+5mM MgCl₂，pH 7.4的緩沖溶液中20-40min；

2）將傳感器在100mM PBS+140mM NaCl+5mM MgCl₂，pH 7.4的緩沖溶液中利用方波伏安法對電化學信號進行檢測。

8.權利要求6所述電化學適體傳感器的再生方法，包括：將傳感器在1μM適體溶液中培育2h的方法再生，所述適體溶液為1μM適體、100mM PBS、100mM NaCl、1mM MgCl₂，pH 7.4，所述適體序列為5’-ATC AGG GCT AAA GAG TGC AGA GTT ACT TAG-3’。