[發明專利]中華按蚊烯醇化酶結合蛋白基因及其制備方法

在審

• 申請號: 201610119304.9
• 申請日: 2016-03-02
• 公開（公告）號: CN105695474A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 張超;顧亞萍;唐建霞;曹俊;高琪
• 申請（專利權）人: 江蘇省血吸蟲病防治研究所
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/10
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 殷紅梅;劉海

1.一種中華按蚊烯醇化酶結合蛋白基因，其特征是：所述中華按蚊烯醇化酶結合蛋白基因如SEQIDNo：1所示；所述中華按蚊烯醇化酶結合蛋白基因的氨基酸序列如SEQIDNo：2所示。

2.一種中華按蚊烯醇化酶結合蛋白基因的制備方法，其特征是，包括以下步驟：

（1）采用中華按蚊成蚊mRNA反轉錄獲得cDNA模板；

（2）以cDNA為模板，采用引物F1和F2經PCR反應體系進行擴增；所述引物F1的序列為：cagtnctnggntgncnttgntcncttcg，其中n為a、t、g或c；所述引物F2的序列為cgancngntgnttnggnntcacnggntg，其中n為a、t、g或c；

（3）擴增產物進行加尾反應，得到EBP基因部分序列，然后采用引物對F3和F4、F5和F6擴增EBP3‘和5’端序列；最后使用引物F7和F8擴增出全長EBP基因。

3.如權利要求2所述的中華按蚊烯醇化酶結合蛋白基因的制備方法，其特征是：所述PCR反應體系包括：1μlcDNA模板、1μl引物F1、1μl引物F2、2μl10×buffer、3μl25mMMgCl₂、4μl2mMdNTPs、1μlTaq聚合酶和7μl水。

4.如權利要求2所述的中華按蚊烯醇化酶結合蛋白基因的制備方法，其特征是：所述步驟（2）擴增過程為：94℃、4min；94℃、30sec；50℃、30sec；72℃、1min，共30個循環；72℃、7min；4℃、12min。

5.如權利要求2所述的中華按蚊烯醇化酶結合蛋白基因的制備方法，其特征是：所述步驟（3）加尾過程為：向步驟（2）的擴增產物中加入0.5μldATP及普通TaqDNA聚合酶，混勻后置于72℃孵育60min進行加尾反應。

6.如權利要求2所述的中華按蚊烯醇化酶結合蛋白基因的制備方法，其特征是：所述引物F3的序列為gtggaccaactccacccgactcggttcc；所述引物F4的序列為tatctggccgacacgcgcatcgactacg；所述引物F5的序列為tcgactacgtcctgccgccaaccgtgac；所述引物F6的序列為tcggggcaaaacggaaacctacaagctg；所述引物F7的序列為ggacgtcggcagtccttggttgccgttg；所述引物F8的序列為cttcgacgatcggctggttgggaatcac。