[發(fā)明專利]一種利用牦牛血制備無水氯化血紅素的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610117183.4
• 申請日: 2016-03-02
• 公開（公告）號: CN105567759A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高維東;謝小冬;彌超;魏美玲;朱明
• 申請（專利權(quán)）人: 蘭州天和生物催化技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18
• 代理公司: 甘肅省知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)中心 62100
• 代理人: 劉繼春

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種無水氯化血紅素的制備方法，特別是一種利用牦牛血液制備無水氯化血紅素的方法。

背景技術(shù)

牦牛是中國的主要牛種之一，是青藏高原牧區(qū)的優(yōu)勢種家畜和當家畜種，具有頑強的生命力。我國是世界牦牛的發(fā)源地，全世界90%的牦牛生活在我國青藏高原及毗鄰的6個省區(qū)。牦牛肉蛋白質(zhì)高達21%，脂肪低，氨基酸品種全，品質(zhì)佳，風味好。牦牛奶濃稠，干物質(zhì)含量18%左右、脂肪含量7%左右、蛋白質(zhì)含量5%左右。毛皮有特色，開發(fā)價值大。據(jù)測算，對牦牛肉、乳、毛、皮、骨、血等進行綜合開發(fā)，可獲得高出原料5倍的經(jīng)濟增加值,僅牦牛業(yè)可實現(xiàn)幾百億的產(chǎn)值。目前，對于牦牛肉、乳的利用比較充分，而牦牛血液因為有較大的血腥味而利用率不高。但是牦牛血液中血紅蛋白含量較高（73.34～99.48g/L）,明顯高于其他動物，因而它是制備氯化血紅素很好的原料。

血紅素是一種鐵卟啉化合物，它是血紅蛋白、肌紅蛋白、細胞色素、過氧化氫酶和過氧化物酶的輔基。主要存在于動物血液和肌肉中，是動物血液中的天然色素,在醫(yī)藥、食品、化工、保健品、建筑及化妝品行業(yè)中有廣泛應(yīng)用。血紅素除了可以用作食品中的色素添加劑外,還是目前治療缺鐵性貧血(IDA)療效較好的一種補鐵劑,具有生物利用度高、無體內(nèi)鐵蓄積中毒及胃腸刺激等不良反應(yīng)等優(yōu)點,同時還是抗貧血和抗腫瘤藥物的重要原料,我國于1998年正式批準以血紅素為基本原料的血卟啉為抗腫瘤新藥。美國FDA已于1983年7月正式批準雅培公司的氯化血紅素作為藥品使用。

目前，關(guān)于氯化血紅素的制備方法有很多，但是基本上都要用到大量的化學試劑，這樣既造成了試劑的浪費和環(huán)境的污染同時也使生產(chǎn)成本很高。本發(fā)明旨在以牦牛血液為原料，不用加抗凝劑的血液通過酶解法制備氯化血紅素，既降低了生產(chǎn)成本又便于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于上述牦牛血液利用率低，現(xiàn)有制備氯化血紅素的方法浪費試劑、污染環(huán)境、生產(chǎn)成本高的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種使用化學試劑少、成本較低、環(huán)境污染較低的利用牦牛血液制備無水氯化血紅素的方法。

本發(fā)明的目的是按下面技術(shù)方案實現(xiàn)的，一種利用牦牛血液制備無水氯化血紅素的方法，其特征在于按照紅細胞的收集、紅細胞的破碎、血紅蛋白的酶解與氯化血紅素的提取步驟進行，具體如下所述：

1.紅細胞的收集

用50ml試管收集新鮮的牦牛血液20ml，用紗布進行過濾，除去較大雜質(zhì)，收集過濾液，靜置1小時后待血液凝固分層后，吸去上層淡黃色的液體,得到下層紅細胞凝固物12ml。

2.紅細胞的破碎

在紅細胞凝固物中添加0.5～1.25倍的去離子水，放入超聲波中進行破碎15min，同時用玻璃棒進行攪拌，使固體凝固物充分分散，同時使紅細胞破碎，釋放血紅蛋白；將溶液快速的倒入六個小試管中，在60℃避光條件下加熱30min，之后用3000r/min離心機離心10min,將六個小試管中的上層液體倒入到20ml錐形瓶中，去除下層變性的雜蛋白,得到血紅蛋白溶液。

3.血紅蛋白的酶解

將血紅蛋白溶液的用HCl0.1mol/L標準溶液調(diào)節(jié)PH=6.8～7.0，放于50℃恒溫水浴鍋中加熱20min，加入酶活力為4000u/g中性蛋白酶0.3g,溫度45℃；水解5小時后加入酶活力為2000u/g風味酶0.5g，調(diào)節(jié)至pH=6.8～7.0,溫度53℃；水解反應(yīng)完成后，加熱煮沸滅酶。

4.氯化血紅素的提取

血紅蛋白經(jīng)酶解后，肽鏈被斷開，水解液中有血紅素，血紅素肽及肽片段，用HCl0.1mol/L溶液調(diào)pH=4.5后，加入質(zhì)量濃度1g/100mL的乙酸鈉溶液，以3000r/min轉(zhuǎn)速離心10min析出沉淀，收集沉淀，依次用離子水、體積分數(shù)50%的乙酸液、體積分數(shù)95%乙醇溶液洗滌一次，再用乙醚洗滌兩次，在零下20℃冷凍干燥8小時，得到氯化血紅素。

本發(fā)明利用牦牛血液制備無水氯化血紅素，使動物血液資源得到了充分有價的利用。制備無水氯化血紅素的方法簡單，易于操作，所用化學試劑少、成本較低、環(huán)境污染較低，便于工業(yè)化生產(chǎn)。

具體實施方式

實施例1；

1.紅細胞的收集：用50ml試管收集新鮮的牦牛血液20ml，用紗布進行過濾，除去較大雜質(zhì)，收集過濾液，靜置1小時后待血液凝固分層后，吸去上層淡黃色的液體,得到下層紅細胞凝固物12ml。