[發(fā)明專利]一種利用牦牛血制備無水氯化血紅素的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201610117183.4
• 申請日: 2016-03-02
• 公開（公告）號: CN105567759A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發(fā)明（設計）人: 高維東;謝小冬;彌超;魏美玲;朱明
• 申請（專利權）人: 蘭州天和生物催化技術有限公司
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18
• 代理公司: 甘肅省知識產(chǎn)權事務中心 62100
• 代理人: 劉繼春

1.一種利用牦牛血液制備無水氯化血紅素的方法，其特征在于按照紅細胞的收集、紅細胞的破碎、血紅蛋白的酶解與氯化血紅素的提取步驟進行；具體如下所述：

（1）紅細胞的收集

用50ml試管收集新鮮的牦牛血液20ml，用紗布進行過濾，除去較大雜質，收集過濾液，靜置1小時后待血液凝固分層后，吸去上層淡黃色的液體,得到下層紅細胞凝固物12ml；

（2）紅細胞的破碎

在紅細胞凝固物中添加0.5～1.25倍的去離子水，放入超聲波中進行破碎15min，同時用玻璃棒進行攪拌，使固體凝固物充分分散，同時使紅細胞破碎，釋放血紅蛋白；將溶液快速的倒入六個小試管中，在60℃避光條件下加熱30min，之后用3000r/min離心機離心10min,將六個小試管中的上層液體倒入到20ml錐形瓶中，去除下層變性的雜蛋白,得到血紅蛋白溶液；

（3）血紅蛋白的酶解

將血紅蛋白溶液的用HCl0.1mol/L標準溶液調節(jié)PH=6.8～7.0，放于50℃恒溫水浴鍋中加熱20min，加入酶活力為4000u/g中性蛋白酶0.3g,溫度45℃；水解5小時后加入酶活力為2000u/g風味酶0.5g，調節(jié)至pH=6.8～7.0,溫度53℃；水解反應完成后，加熱煮沸滅酶；

（4）氯化血紅素的提取

血紅蛋白經(jīng)酶解后，肽鏈被斷開，水解液中有血紅素，血紅素肽及肽片段，用HCl0.1mol/L溶液調pH=4.5后，加入質量濃度1g/100mL的乙酸鈉溶液，以3000r/min轉速離心10min析出沉淀，收集沉淀，依次用離子水、體積分數(shù)50%的乙酸液、體積分數(shù)95%乙醇溶液洗滌一次，再用乙醚洗滌兩次，在零下20℃冷凍干燥6小時，得到氯化血紅素。