[發明專利]革蘭氏陽性菌菌影的制備方法及其應用有效
| 申請號： | 201610116309.6 | 申請日： | 2016-03-01 |
| 公開（公告）號： | CN105784984B | 公開（公告）日： | 2017-12-19 |
| 發明（設計）人： | 鞠興榮;都立輝;吳學友;袁建;何榮;陳正行 | 申請（專利權）人： | 南京財經大學 |
| 主分類號： | C12N1/20 | 分類號： | C12N1/20 |
| 代理公司： | 南京匯盛專利商標事務所(普通合伙)32238 | 代理人： | 袁靜 |
| 地址： | 210023 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 革蘭氏 陽性 菌菌影 制備 方法 及其 應用 | ||
1.革蘭氏陽性菌菌影的制備方法，其特征在于所述革蘭氏陽性菌為單增李斯特菌，包括如下步驟：
（1）在革蘭氏陽性菌懸液中加入NaOH、SDS和CaCO3，在30-40℃條件下孵育，離心，收集沉淀，洗滌后制成重懸液A；所述革蘭氏陽性菌懸液的OD600為0.3～0.5；
（2）在所述重懸液A中加入H2O2，在30-40℃條件下孵育，離心，收集沉淀，洗滌后制成重懸液B；
（3）將重懸液B在20-30℃條件下孵育，離心，收集沉淀，洗滌，得到革蘭氏陽性菌菌影；
步驟（1）中革蘭氏陽性菌懸液中加入的NaOH的終濃度為20-40mmol/L，加入的SDS的終濃度為0.1-0.3mmol/L，每升革蘭氏陽性菌懸液中CaCO3的加入量為9-11mmol；步驟（1）中，懸液孵育時在80-120r/min條件下振搖，孵育時間為40-60min；步驟（2）中所述重懸液A中加入的H2O2的最終質量百分濃度為0.02-0.05%；步驟（2）中，懸液孵育時在80-120r/min條件下振搖，孵育時間為20-40min；步驟（3）中，所述重懸液B孵育時在30-50r/min條件下振搖，孵育時間為20-40min。
2.根據權利要求1所述革蘭氏陽性菌菌影的制備方法，其特征在于采用生理鹽水進行洗滌。
3.根據權利要求2所述革蘭氏陽性菌菌影的制備方法，其特征在于步驟（2）中重懸液B是將所述沉淀重懸于55-65%的乙醇水溶液中所得。
4.根據權利要求3所述革蘭氏陽性菌菌影的制備方法，其特征在于所述重懸液A是將所述沉淀重懸于水后所得。
5.權利要求1-4之一方法制備的菌影在制備用于檢測所述革蘭氏陽性菌的抗體方面的應用。
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