[發明專利]一種基于聚合物發光點的免疫探針及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201610116190.2
• 申請日: 2016-03-01
• 公開（公告）號: CN105784988B
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發明（設計）人: 俞英;周麗娜;曹玉娟;林碧霞;水玲玲
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

本發明公開了一種基于聚合物發光點的免疫探針及其制備方法與應用。本發明通過CN?PPV和PSMA反應，制備得到PDs水溶液；接著將PDs水溶液、PBS和EDC混勻，混勻，得到混合液體A；將混合液體A和亞胺硫磷抗體混合反應，得到基于聚合物發光點的免疫探針。該免疫探針能特異性識別亞胺硫磷，因此可用其定性檢測亞胺硫磷、半定量或定量檢測亞胺硫磷。本發明提供的定性和半定量檢測方法為原位可視化檢測方法；本發明提供的定量檢測方法靈敏度高，特異性強，可以進行高靈敏度定量檢測。

技術領域

本發明涉及檢測技術領域，特別涉及一種基于聚合物發光點的免疫探針及其制備方法與應用。

背景技術

農藥對食品、環境及生態的影響越來越受到人們的關注。農殘樣品具有組分復雜、分析物含量低的特點，對其含量進行測定是一項重要且具有挑戰的工作。由于農殘含量與人們的日常生活緊密相關，建立高靈敏度、現場可視化的農殘檢測方法是未來的發展方向之一。

亞胺硫磷是目前常用的一種有機磷農藥，最常用的檢測方法主要有高效液相色譜(HPLC)、液相色譜-質譜(LC-MS)，但通常需要經過繁雜的樣品前處理，所需儀器成本高，需專業人員操作。酶聯免疫分析法(ELISA)也用來測定亞胺硫磷，如2008年Liang等根據硫代磷酸酯半族衍生合成半抗原制備出多克隆通用抗體，對包括亞胺硫磷在內的8種有機磷農藥進行了檢測，其中亞胺硫磷的IC50為159.7ng/mL。2013年Liu將電化學化學發光法和ELISA結合運用檢測亞胺硫磷，測得亞胺硫磷的IC50為8.56mg/L。但酶聯免疫法步驟多，酶存在易失活的缺點，檢測限不高。近幾年表面增強拉曼光譜法受到關注，2014年Fan基于多克隆抗體研究，在基底表面修飾金原子后，用拉曼光譜對蘋果樣品中亞胺硫磷殘留進行快速檢測。2015年Pan使用銀膠體作為SERS基底，用拉曼光譜測定茶葉、蘋果、橘子中農藥殘留。拉曼光譜法需要用金、銀等貴金屬包覆基底，成本較高，同樣需要大型貴重儀器檢測。上述常用的檢測方法都難以適用現場檢測及可視化檢測。

熒光探針常用來可視化原位檢測，量子點是受到關注的一類優良探針，廣泛應用在定量檢測和成像中。但傳統的量子點主要是鎘基量子點，存在重金屬污染，因此制備和應用環境友好材料的探針十分必要。除了碳點、硅點外，近年來用有機聚合物作為原料合成的聚合物點，因其兼具有機熒光染料和量子點的特性，越來越受到關注。聚合物納米顆粒粒徑較小、熒光強度高、抗光漂白能力強。為了使探針具有識別特定分析物的功能，常常選用適配體、抗體等來修飾探針。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種基于聚合物發光點的免疫探針的制備方法。

本發明的另一目的在于提供通過上述制備方法得到的基于聚合物發光點的免疫探針。

本發明的再一目的在于提供所述基于聚合物發光點的免疫探針的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種基于聚合物發光點的免疫探針的制備方法，包括如下步驟：

(1)聚合物點(PDs)的合成及修飾：分別將聚合物CN-PPV(聚苯撐乙烯衍生物)和PSMA(苯乙烯-馬來酸酐共聚物)溶解于THF(四氫呋喃)中，得到CN-PPV溶液和PSMA溶液；將CN-PPV溶液、PSMA溶液和THF混合，得到均相溶液，其中，在均相溶液中，CN-PPV和PSMA按質量比3：1～8：1配比；再將均相溶液加入到處于超聲震蕩狀態下的超純水中，超聲震蕩；接著通過氮氣除去THF，濃縮，過濾，得到PDs水溶液；

(2)亞胺硫磷探針的合成：將PDs水溶液、PBS和EDC(碳二亞胺)混勻，得到混合液體A，其中，PDs和EDC按質量比1：2～1：6配比；將混合液體A和亞胺硫磷抗體混合，振蕩反應，離心過濾，得到基于聚合物發光點的免疫探針，其中，亞胺硫磷抗體的加入量按亞胺硫磷抗體和PDs的質量比為5：(2～8)配比。

步驟(1)中所述的CN-PPV溶液的濃度優選為1.0mg/mL。