[發明專利]一種基于聚合物發光點的免疫探針及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 201610116190.2
• 申請日: 2016-03-01
• 公開（公告）號: CN105784988B
• 公開（公告）日: 2018-07-13
• 發明（設計）人: 俞英;周麗娜;曹玉娟;林碧霞;水玲玲
• 申請（專利權）人: 華南師范大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉

1.一種基于聚合物發光點的免疫探針的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)聚合物點的合成及修飾：分別將聚合物CN-PPV和PSMA溶解于THF中，得到CN-PPV溶液和PSMA溶液；將CN-PPV溶液、PSMA溶液和THF混合，得到均相溶液，其中，在均相溶液中，CN-PPV和PSMA按質量比3：1～8：1配比；再將均相溶液加入到處于超聲震蕩狀態下的超純水中，超聲震蕩；接著通過氮氣除去THF，濃縮，過濾，得到PDs水溶液；

(2)亞胺硫磷探針的合成：將PDs水溶液、PBS和EDC混勻，得到混合液體A，其中，PDs和EDC按質量比1：2～1：6配比；將混合液體A和亞胺硫磷抗體混合，振蕩反應，離心過濾，得到基于聚合物發光點的免疫探針，其中，亞胺硫磷抗體的加入量按亞胺硫磷抗體和PDs的質量比為5：(2～8)配比；

步驟(2)中所述的PBS溶液為pH＝5～9、1M的PBS；

步驟(2)中所述的混合液體A中PDs的濃度為0.038～0.04mg/mL；

步驟(2)中所述的混合液體A中EDC的濃度為0.15～0.16mg/mL；

步驟(2)中所述的振蕩反應的條件為于20～38℃振蕩反應1～4h。

2.根據權利要求1所述基于聚合物發光點的免疫探針的制備方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的均相溶液中CN-PPV和PSMA為按質量比為5：1配比；

步驟(1)中所述的均相溶液中CN-PPV的濃度為0.048～0.050mg/mL；

步驟(1)中所述的均相溶液中PSMA的濃度為0.008～0.010mg/mL；

步驟(1)中所述的超純水的用量按超純水的體積為均相溶液體積的1.9～2倍體積計算；

步驟(1)中所述的超聲震蕩的功率為160～200W；

步驟(1)中所述的超聲震蕩的時間為10min；

步驟(1)中所述的濃縮的條件為于70～120℃的溫度下進行濃縮；

步驟(1)中所述的過濾為通過0.2μm的過濾膜過濾。

3.根據權利要求1所述基于聚合物發光點的免疫探針的制備方法，其特征在于：

步驟(2)中所述的混合液體A中PDs和EDC為按質量比1：4配比；

步驟(2)中所述的亞胺硫磷抗體的加入量為按亞胺硫磷抗體和PDs的質量比為5：(2～6)配比。

4.根據權利要求3所述基于聚合物發光點的免疫探針的制備方法，其特征在于：

所述的PBS溶液pH＝7.3、1M的PBS；

所述的亞胺硫磷抗體的加入量為按亞胺硫磷抗體和PDs的質量比為5：4配比；

所述的振蕩反應的條件為25～37℃振蕩反應1.5～2.5h。

5.一種基于聚合物發光點的免疫探針，其特征在于：通過權利要求1～4任一項所述的制備方法得到。

6.權利要求5所述的基于聚合物發光點的免疫探針的應用，其特征在于：將所述基于聚合物發光點的免疫探針用于定性檢測亞胺硫磷、半定量或定量檢測亞胺硫磷。

7.一種定性及半定量原位檢測亞胺硫磷的方法，其特征在于包括如下步驟：

I、將權利要求5所述的基于聚合物發光點的免疫探針涂布或噴射于待檢測物體上；

II、晾干后，用水淋洗后于紫外燈下觀察；

III、出現橙色熒光，表明待檢測物體上含有亞胺硫磷；

IV、根據橙色熒光強度能進行半定量檢測。