[發明專利]一種球形節桿菌及其產生的透明質酸酶

有效

• 申請號: 201610115793.0
• 申請日: 2016-03-02
• 公開（公告）號: CN105567606B
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 張京良;朱常亮;江曉路
• 申請（專利權）人: 青島海洋生物醫藥研究院股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/26;C12R1/06
• 代理公司: 青島致嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 37236
• 代理人: 劉曉

本發明提供了一種球形節桿菌及其產生的透明質酸酶。本發明涉及一種來源于潮間帶污泥的球形節桿菌Arthrobacter globiformis A152，該菌株具有營養條件簡單、易培養的特點，使用本發明的菌株生產透明質酸酶，具有產酶活力高、穩定性好、成本低的特點，能夠實現大規模培養，滿足工業化的應用。本發明還涉及了一種通過變溫調控生產方法獲得的透明質酸酶，將種子培養轉接到發酵培養過程中進行低溫誘導發酵，發酵液經過分離純化、冷凍干燥，可以獲得不同規格的透明質酸酶產品，該方法具有產酶量高，生產周期短，操作簡單的優勢。本發明中來源于Arthrobacter globiformis A152的透明質酸酶，SDS?PAGE確定該酶分子量為73.7 kDa。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種球形節桿菌 A152菌株及其產生的透明質酸酶。

背景技術

透明質酸(Hyaluronic acid，簡稱 HA)，又名玻璃酸，是由重復單元[(1–?3) β-D-N乙酰葡萄糖胺-(GlcNAc)-(1–?4) β-D-葡萄糖醛酸(GlcUA)]交替連接而成的一種鏈狀高分子聚合物，是構成細胞外基質的主要成分，廣泛存在于皮膚、軟骨、關節、玻璃體等生物組織中，具有重要的生理學功能。根據其分子量不同可以分為高分子量透明質酸( HMWHA )和低分子量透明質酸( LMWHA )，HMWHA能夠抑制內皮細胞的遷移，抗血管生成活性，促進人體傷口愈合；LMWHA促進內皮細胞的分化，抗細胞凋亡，促進軟骨、內皮等細胞的遷移，還具有抗炎的作用，HA以其獨特的理化性質，在醫學和藥學研究方面發揮了重要的作用。

透明質酸酶又叫玻璃酸酶，是可使HA發生低分子化作用的糖苷酶，也能降解其他機體組織中的酸性粘多糖，其廣泛存在于真核生物和原核生物中，具有特異性的生理學活性。目前公認的分類方法將透明質酸酶分為三大類：(1)第一類是內切-β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.35)，主要來源于脊椎動物以及某些生物的毒液。這類酶是水解酶和轉糖苷酶，通過作用于β-1,4糖苷鍵降解底物得到以四糖為主的終產物。(2)第二類是內切-β-葡萄糖醛酸苷酶(EC 3.2.1.36)，主要從水蛭的唾液腺和十二指腸蟲提取。該類酶是水解酶，主要作用域β-1, 3糖苷鍵，可特異性降解HA，產生以四糖或己糖(還原端為葡萄糖醛酸)為主的終產物；(3)第三類為透明質酸裂解酶(EC4.2.2.1)，主要是由梭菌屬、鏈球菌、鏈霉菌產生，作用于β-l, 4糖苷鍵，通過β-消去機制進行降解，降解HA后的終產物為4,5-不飽和雙糖。

據本發明人通過查閱資料、文獻檢索所知，目前有報道來源于鏈霉菌（Streptomyces koganeiensis）的透明質酸酶，分子量21.6kDa（專利號：CN 102439144 B）；來源于芽孢桿菌的透明質酸酶，分子量123kDa（專利號：CN 103255076 A）；來源于芽孢桿菌（Bacillus niacini）的透明質酸酶，分子量120kDa（Atsushi Kurata等）；來源于噬尼古丁節桿菌（Artbrobacter nicotinovorous）的透明質酸酶，分子量22.1kDa（蘇康等）；來源于豬鏈球菌（Streptococcus suis）的透明質酸酶，分子量130 kDa（Andrew G等）；來源于化膿鏈球菌（Streptococcus pyogenes）的透明質酸酶，分子量40 kDa（Sudhir Kumar Singh等）；來源于鏈球菌屬的透明質酸酶，分子量111 kDa（John E. Coligan等）；來源于無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae）的透明質酸酶，分子量58 kDa（Martin Oettl等）。

通過大量信息檢索，在產酶微生物與酶的分子量方面比對，未發現有與本發明人研究的透明質酸酶相同的。

發明內容