[發(fā)明專利]一種球形節(jié)桿菌及其產(chǎn)生的透明質(zhì)酸酶

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610115793.0
• 申請日: 2016-03-02
• 公開（公告）號: CN105567606B
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張京良;朱常亮;江曉路
• 申請（專利權(quán)）人: 青島海洋生物醫(yī)藥研究院股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N9/26;C12R1/06
• 代理公司: 青島致嘉知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 37236
• 代理人: 劉曉

1.一種球形節(jié)桿菌，其特征在于其分類命名為球形節(jié)桿菌Arthrobacter globiformisA152，其保藏單位：中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏日期：2015年10月29日，保藏編號：CCTCCM 2015649；菌株球形態(tài)時細胞直徑為0.6-0.8μm，桿形態(tài)時細胞直徑為0.5-0.8μm×1-4μm，菌落淡黃色，呈圓形，邊緣光滑。

2.權(quán)利要求1所述的球形節(jié)桿菌變溫調(diào)控生產(chǎn)的透明質(zhì)酸酶，其特征在于它通過以下制備方法制得：

（1）將斜面菌種接種到已滅菌的種子培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度31℃-37℃、轉(zhuǎn)速120-180rpm的條件下培養(yǎng)16-48h，獲得種子培養(yǎng)液；

（2）將種子培養(yǎng)液接種到已滅菌的發(fā)酵培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度18℃-30℃、轉(zhuǎn)速120-180rpm的條件下培養(yǎng)16-48h，獲得透明質(zhì)酸酶發(fā)酵液；

（3）離心或過濾分離所述透明質(zhì)酸酶發(fā)酵液，取上清液；

（4）用硫酸銨沉淀所述上清液，離心或過濾收集粗蛋白；

（5）緩沖液復(fù)溶步驟（4）收集的粗蛋白，超濾或透析除去小分子雜質(zhì)，得到純化的透明質(zhì)酸酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的透明質(zhì)酸酶，其特征在于：制得的所述透明質(zhì)酸酶的分子量為73.7 kDa。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的透明質(zhì)酸酶，其特征在于：所述制備方法還包括步驟（6）：將步驟（5）中得到的透明質(zhì)酸酶利用QFF離子交換色譜或Sephadex G100凝膠過濾色譜精制，得到電泳純的透明質(zhì)酸酶。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的透明質(zhì)酸酶，其特征在于：所述制備方法還包括步驟（6）：將步驟（5）得到的透明質(zhì)酸酶進行真空冷凍干燥。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的透明質(zhì)酸酶，其特征在于：所述制備方法還包括步驟（7）：將步驟（6）得到的透明質(zhì)酸酶進行真空冷凍干燥。