[發明專利]蛹蟲草斜面固體菌種有效替代液體菌種的蛹蟲草培養方法

在審

• 申請號: 201610112433.5
• 申請日: 2016-03-01
• 公開（公告）號: CN105733957A
• 公開（公告）日: 2016-07-06
• 發明（設計）人: 王建瑞;段騰益;王勇超;劉宇;劉承;程顯好
• 申請（專利權）人: 魯東大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01G1/04;C12R1/645
• 代理公司: 煙臺雙聯專利事務所(普通合伙) 37225
• 代理人: 梁翠榮

1.蛹蟲草斜面固體菌種有效替代液體菌種的蛹蟲草培養方法，其特征在于其包括如下步驟：

（一）菌種準備：

低溫保藏蛹蟲草菌種:蛹蟲草菌種蛹蟲草5.701，來源于中國普通微生物菌種保藏管理中心;

（二）蛹蟲草胡蘿卜斜面菌種（母種）培養：

（1）配制培養基：按重量份將200份胡蘿卜切成0.8-1.2cm的小塊，在沸水中煮20分鐘，然后進行過濾，取汁，后加入葡萄糖20份，硫酸鎂0.5份，磷酸二氫鉀1份，瓊脂20份，融化后，定容成1000mL，自然pH值；

（2）培養基分裝，滅菌：

將配制好的培養基分裝于18mm×180mm試管中，封口，在121℃條件下，滅菌20min；

（3）冷卻，接種：

滅完菌后取出培養基，自然冷卻至20℃-30℃，在無菌條件下，接入蛹蟲草菌種；

（4）培養：

將接好種的培養基置于恒溫培養箱里，25℃培養12天，菌絲充分生長；

（5）挑選：

將長勢較好沒有出現退化現象的蛹蟲草胡蘿卜斜面菌種選出；

（三）接種：

將蛹蟲草胡蘿卜斜面菌種在無菌操作下轉移到一次性注射針管中，并吸入葡萄糖注射液，再將蛹蟲草胡蘿卜斜面菌種與葡萄糖注射液混合后的溶液從針頭擠出再將擠出的溶液倒回一次性注射針管中，再次將溶液從針頭擠出再將擠出的溶液倒回一次性注射針管中，再將溶液從針頭擠出再將擠出的溶液倒回一次性注射針管中；直至蛹蟲草胡蘿卜斜面菌種與葡萄糖注射液充分混勻，制成蛹蟲草液體固化菌種；將蛹蟲草液體固化菌種接入糧食培養基或蠶蛹；每瓶糧食培養基接入5mL蛹蟲草液體固化菌種；每只蠶蛹接0.1mL蛹蟲草液體固化菌種；

（四）培養：

將上述接好種的蛹蟲草培養基或接好種的蠶蛹置于恒溫培養箱里進行培養。

2.根據權利要求1所述的蛹蟲草斜面固體菌種有效替代液體菌種的蛹蟲草培養方法，其特征在于所述的糧食培養基由小麥40g，水50mL配制而成，自然pH值；且將配制好的糧食培養基分裝于500ml罐頭瓶中，食用菌專用封口膜封口，在121℃條件下滅菌20分鐘；滅完菌后取出糧食培養基，自然冷卻至20℃-30℃；將蛹蟲草液體固化菌種接入冷卻后的糧食培養基，置于恒溫培養箱里，16-18℃培養8-12天，菌絲充分生長后，轉移到18-20℃、相對濕度85-95%、每天11-13小時散射光條件下培養50—90天；將長出的子實體用鑷子采出，去掉子實體連接的培養基進行子實體的采收。

3.根據權利要求1所述的蛹蟲草斜面固體菌種有效替代液體菌種的蛹蟲草培養方法，其特征在于所述的蠶蛹需選擇頭部發白活性較強的蠶蛹，并在紫外線下照射15min；將蛹蟲草液體固化菌種接入蠶蛹，將接好種的蠶蛹置于恒溫培養箱里，18℃恒溫培養8-12天，測定僵化率。