[發明專利]一種煙葉中角鯊烯的檢測方法

在審

• 申請號: 201610110836.6
• 申請日: 2016-02-29
• 公開（公告）號: CN105699561A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 陳澤鵬;鄭珊珊;譚小春;萬樹青;盧健;張紀利
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司廣東省公司;廣西中煙工業有限責任公司;華南農業大學
• 主分類號: G01N30/74
• 分類號: G01N30/74;G01N30/06
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

技術領域

本發明涉及煙葉中成分的檢測技術領域，更具體地，涉及一種煙葉中所含 角鯊烯的高效液相色譜檢測方法。

背景技術

角鯊烯最初是從鯊魚的肝油中發現的，1914年被命名為Squalene，其化學 名稱為2,6,10,15,19,23--六甲基--2,6,10,14,18,22--二十四碳六烯，屬開鏈三萜類化 合物。角鯊烯具有提高人體內超氧化物歧化酶(SOD)活性、增強機體抗氧化性和 免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤等多種生理功能,是一種無毒 性的具有防病治病作用的生物活性物質。最近研究發現角鯊烯對人體還具有解 毒作用，可移除組織中的脂溶性毒素。2014年4月，國家煙草專賣局下發“關 于”加快卷煙降焦減害技術成果推廣應用的通知(國煙辦綜[2014]218號)，提 出要加大卷煙減害技術重大專項研究成果的應用推廣力度，要采取針對性技術 措施加快卷煙降焦減害步伐。

本申請人在煙葉天然抗氧化劑角鯊烯的生態累積與減害的研究工作，發現 角鯊烯可以選擇性地降低煙氣中苯并芘、巴豆醛、NH3等有害成分，降低卷煙 危害指數，同時角鯊烯具有清除煙氣中的氣相和固相自由基功能由于角鯊烯具 有獨特生理功能，目前開發利用角鯊烯已成為科技界研究的熱點。

但是，目前國內外還沒有可參考的煙葉中角鯊烯定性和定量的檢測方法， 因此，在煙草行業建立烤煙中角鯊烯定性和定量的檢測方法具有前瞻性，也是 十分必要的。而在煙葉中角鯊烯的檢測中，良好的樣品前處理方法對獲得準確 科學的檢測結果起到關鍵性作用。在確定的檢測條件下，采用不同提取劑提取 樣品中角鯊烯，其提取效率、提取操作用時等因素都是必須考慮的重要因素， 各個因素之間又是相互影響的關系，目前未見基于高效液相色譜法檢測煙葉中 角鯊烯的樣品前處理研究報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是填補現有煙葉中角鯊烯的檢測技術不足，尤其 是適于高效液相色譜法檢測煙葉中角鯊烯的樣品前處理方法的不足，提供一種 煙葉中角鯊烯的檢測方法。

本發明的技術方案通過以下技術方案予以實現：

本發明以甲醇和乙腈為流動相，采用填有粒徑5μm的高效固定相的柱色譜 分離技術，將經本發明方法前處理后的樣品注入高效液相色譜儀進行色譜分離， 用紫外吸收檢測器，檢測角鯊烯的吸收值，采用外標法，根據吸收峰面積計算 其含量；

具體地，提供一種煙葉中角鯊烯的檢測方法，包括以下步驟：

S1.樣品前處理得到樣品液，在經過硅膠凈化處理后得到樣品待測液；

S2.配制標準溶液，建立標準曲線；

S3.檢測：吸取樣品待測液注入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收 檢測器檢測角鯊烯；

S4.采用外標法，根據吸收峰面積計算其含量；

其中，步驟S1所述樣品前處理包括以下步驟：

S11.煙葉切絲，取煙絲加入三氯甲烷超聲提取30～60分鐘，收集提取液， 用三氯甲烷沖洗提取后的煙絲，合并提取液和沖洗液；

S12.將步驟S11所得合并的提取液和沖洗液旋轉蒸發至干，用正己烷溶解， 經第二次旋轉蒸發至近干，用色譜級乙腈溶解，過0.22μm有機系濾膜得樣品液；

S13.取步驟S12所述樣品液過小柱凈化處理，采用濕法裝柱，小柱材料為 0.06gPSA(N-丙基乙二胺固相吸附劑)和適量無水硫酸鈉；

步驟S3所述檢測的條件為：

Agilent1100高效液相色譜儀HPLC配紫外檢測器；

色譜柱：C18，5μm，4.6×250mm；

柱溫：30℃；

流動相類型：甲醇∶乙腈，體積比為75/25；

流動相流速：1mL/min；

檢測波長為：210nm；

進樣量：10μL。

優選地，步驟S2所述配制標準溶液的方法是準確稱取0.1g角鯊烯標準品， 精確至0.0001g，用乙腈溶解后定容至100mL配制成1000mg/L的角鯊烯標準 溶液，充分振蕩搖勻即得。