[發明專利]一種煙葉中角鯊烯的檢測方法

在審

• 申請號: 201610110836.6
• 申請日: 2016-02-29
• 公開（公告）號: CN105699561A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 陳澤鵬;鄭珊珊;譚小春;萬樹青;盧健;張紀利
• 申請（專利權）人: 中國煙草總公司廣東省公司;廣西中煙工業有限責任公司;華南農業大學
• 主分類號: G01N30/74
• 分類號: G01N30/74;G01N30/06
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

1.一種煙葉中角鯊烯的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1.樣品前處理得到樣品液，在經過硅膠凈化處理后得到樣品待測液；

S2.配制標準溶液，建立標準曲線；

S3.檢測：吸取樣品待測液注入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器檢測角鯊烯；

S4.采用外標法，根據吸收峰面積計算其含量；

其中，步驟S1所述樣品前處理包括以下步驟：

S11.煙葉切絲，取煙絲加入三氯甲烷超聲提取30～60分鐘，收集提取液，

用三氯甲烷沖洗提取后的煙絲，合并提取液和沖洗液；

S12.將步驟S11所得合并的提取液和沖洗液旋轉蒸發至干，用正己烷溶解，

經第二次旋轉蒸發至近干，用色譜級乙腈溶解，過0.22μm有機系濾膜得樣品液；

S13.取步驟S12所述樣品液過小柱凈化處理，采用濕法裝柱，小柱材料為0.06gPSA和適量無水硫酸鈉；

步驟S3所述檢測的條件為：

Agilent1100高效液相色譜儀HPLC配紫外檢測器；

色譜柱：C18，5μm，4.6×250mm；

柱溫：30℃；

流動相類型：甲醇∶乙腈，體積比為75/25；

流動相流速：1mL/min；

檢測波長為：210nm；

進樣量：10μL。

2.根據權利要求1所述煙葉中角鯊烯的檢測方法，其特征在于，步驟S2所述配制標準溶液的方法是準確稱取0.1g角鯊烯標準品，精確至0.0001g，用乙腈溶解后定容至100mL配制成1000mg/L的角鯊烯標準溶液，充分振蕩搖勻即得。

3.根據權利要求1所述煙葉中角鯊烯的檢測方法，其特征在于，步驟S2所述角鯊烯標準曲線的建立的方法是：采用系列稀釋法，分別配制成濃度為0.002、0.01、0.05、0.2、0.5mg/mL的角鯊烯標準溶液于高效液相色譜進樣檢測；以進樣濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標建立標準曲線，求出角鯊烯濃度與相應峰面積的線性回歸方程。

4.根據權利要求1所述煙葉中角鯊烯的檢測方法，其特征在于，步驟S11在加入三氯甲烷之前，先對煙絲進行渦旋處理，所述渦旋處理是渦旋1min，靜止10min。

5.根據權利要求4所述煙葉中角鯊烯的檢測方法，其特征在于，所述渦旋處理的條件為2000r/min。

6.根據權利要求1所述煙葉中角鯊烯的檢測方法，其特征在于，步驟S11所述三氯甲烷的用量按照與煙絲的比例為1.0g煙絲：30mL三氯甲烷確定。

7.根據權利要求1所述煙葉中角鯊烯的檢測方法，

其特征在于，步驟S11所述超聲提取重復3次。

8.根據權利要求1所述煙葉中角鯊烯的檢測方法，其特征在于，步驟S11所述超聲提取的超聲波功率為500w。

9.根據權利要求4至8任一項所述煙葉中角鯊烯的檢測方法，其特征在于，所述超聲處理的時間為30min。

10.根據權利要求1所述煙葉中角鯊烯的檢測方法，其特征在于，步驟S13所述無水硫酸鈉為0.5g。