[發(fā)明專利]一種促進腸道益生菌增殖的唾液酸化滸苔寡糖制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610110628.6
• 申請日: 2016-02-29
• 公開（公告）號: CN105603023B
• 公開（公告）日: 2019-09-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙超;吳一晶;劉斌;李秋哲;楊成鳳;陳玉青
• 申請（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號: C12P19/26
• 分類號: C12P19/26;A23L33/125;A61K31/7032;A01P1/00
• 代理公司: 福州元創(chuàng)專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

1.唾液酸化滸苔寡糖在制備改善腸道菌群的藥品或保健品上的應(yīng)用，所述唾液酸化滸苔寡糖的制備方法，包括如下步驟：

（1）將滸苔干燥后超微粉碎過80-100目篩得干粉末，向滸苔干粉末中加入體積濃度60-80%乙醇回流提取1-2 h，干粉重量g與乙醇體積mL比為1:20-30，回流結(jié)束后回收去除乙醇循環(huán)使用，烘干，粉碎得到干燥脫脂的滸苔粉末；

（2）向步驟（1）制得的脫脂滸苔粉末中加入蒸餾水，其中滸苔質(zhì)量g與蒸餾水mL體積比為1:20-25，60-70℃萃取溫度下450-600 W微波輔助提取2-3 min，提取結(jié)束后，進行過濾，將濾渣重復(fù)上述步驟進行2-3次提取，將獲得的濾液混合后進行濃縮，抽濾，濾液減壓濃縮至原體積的3-8%，真空冷凍干燥后粉碎；

（3）向步驟（2）所得粉末中加入蒸餾水，其中粉末質(zhì)量g與蒸餾水mL體積比為1:10-20，進行攪拌復(fù)溶，用Sevag法、三氟三氯乙烷法、三氯乙酸法中一種或幾種除蛋白5-8次；

（4）將步驟（3）所得到的溶液，通過HPD-826大孔吸附樹脂填充柱，洗脫液進一步經(jīng)過非極性吸附劑活性炭，活性炭使用量g與洗脫液mL按重量體積比1:30-50去除色素，將活性炭與洗脫液于搖床中60-80 r/min振蕩1-2h，6000-8000rpm離心20-30 min，收集上清液；

（5）將步驟（4）得到的提上清液旋蒸濃縮至原體積的3-8%，按體積比1:3-4加入質(zhì)量濃度為95%的乙醇，攪拌后放入4-10℃條件下靜置24 h，6000-8000rpm離心20-30 min，取上清液減壓濃縮、冷凍干燥得滸苔寡糖的固體粉末；

（6）將步驟（5）中滸苔寡糖，按干粉重量mg與蒸餾水mL體積比為1:5-10溶解，溶液采用截留分子量2000D透析袋處理，收集透析液，在37-40℃及轉(zhuǎn)速為60-80 r/min條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，濃縮至原體積的1/10-1/5；濃縮液采用截留分子量500D透析袋處理，將截留液冷凍干燥，制備得到未唾液酸化滸苔寡糖精制品；

（7）步驟（6）得到的滸苔寡糖精制品按質(zhì)量mg與體積mL比1:0.5-1.0溶解于蒸餾水中，將唾液酸轉(zhuǎn)移酶加入到反應(yīng)體系中進行生物反應(yīng)，唾液酸轉(zhuǎn)移酶用量mg與反應(yīng)體系按質(zhì)量與體積mL比1:3-5，反應(yīng)體系中滸苔寡糖與胞苷一磷酸--N-乙酰神經(jīng)氨酸質(zhì)量濃度比1:1.0-1.5，MgCl₂質(zhì)量終濃度為15-20 mM，pH6.5-8.0，置于35-40℃溫度，80-100rmp搖床條件下反應(yīng)24-36h；

（8）將步驟（7）反應(yīng)體系按體積比1:1添加體積濃度95%乙醇，終止反應(yīng)并沉淀蛋白，6000-8000rpm離心20-30 min去除沉淀，收集上清濃縮，真空冷凍干燥后得到唾液酸化滸苔功能性寡糖粗品；

（9）將步驟（8）所得粗品溶解后過Bio-Gel P-2聚丙烯酰胺凝膠，蒸餾水洗脫，經(jīng)3,5-二硝基水楊酸法測定收集寡糖組分；

（10）將步驟（9）中收集的滸苔寡糖組分溶液采用截留分子量500D透析袋處理，將截留液冷凍干燥，制備得到唾液酸化滸苔寡糖。