[發明專利]一種測定水環境中抗生素的方法

在審

• 申請號: 201610110028.X
• 申請日: 2016-02-26
• 公開（公告）號: CN105758955A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 黃俊;余剛;高杰;王薇;李文超
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京紐盟知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11456
• 代理人: 許玉順

技術領域

本發明涉及檢測抗生素的領域，特別是涉及一種在地表水和地下水樣品中，能夠檢測出22種抗生素的抗生素含量的方法。

背景技術

藥物和個人護理品(PharmaceuticalsandPersonalCareProducts，PPCPs)包括治療疾病、保障健康的人用和獸用藥物，洗浴、護膚等個人護理用品以及香薰、消毒劑等日用化學品，是一類對生態環境和人體健康具有潛在危害的新興污染物，其環境存在、風險評價和毒理學等方面的研究引起了環境科學領域的廣泛關注。環境中PPCPs的來源非常廣泛，制藥廠、醫院、畜禽養殖場、人類日常生活產生的廢水和固體廢物中都含有大量的PPCPs，并以污水、固體廢物等形式進入環境。PPCPs是一類極性或弱極性有機污染物，容易存在于水體中，因此水環境中PPCPs的研究備受關注。獸用抗生素作為PPCPs的一類，被廣泛應用于畜牧養殖、水產養殖等領域，其生產和使用量不亞于人用藥物。

在目前的相關研究中，獸用抗生素通常使用固相萃取和液相色譜串聯質譜(SPE-LC-MS/MS)法分析，方法主要基于EPA1694優化獲得。現有的檢測法規和大多數實驗室，均使用典型的內標法對幾種或十幾種目標物進行分析，內標和目標物之間存在結構和性質差異，在前處理過程中的損耗、色譜保留行為及響應強度均存在較大差異，導致分析方法檢出限較高、穩定性較差，無法對低濃度抗生素準確定量。并且一些抗生素本身具有穩定性差的特點，使用內標法進行測定時，樣品的保存時間較短，對分析測定要求較為苛刻：采集的樣品需避光低溫保存，盡量在3天內完成前處理、45天內完成儀器分析測定。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種環境樣品中22種抗生素的分析方法，可以準確測定環境樣品中的抗生素含量，并有效補償抗生素因降解而導致的濃度變化。從而解決現有的測定方法無法準確測定環境樣品中的抗生素含量和延長保存時間的問題。

為解決上述技術問題，本發明引入更多的同位素內標，改進原有分析方法，建立多同位素內標的分析方法，做到大多數目標物都有對應的同位素標記物作為內標，對應無法購買同位素標記物的目標物，選擇結構、性質相近物質的同位素標記物作為內標。建立靈敏度更高、檢測限更低、穩定性更強的多同位素內標的分析方法。

本發明中一種環境水樣品中抗生素的測定方法，其特征在于，包括富集步驟、分離凈化步驟、樣品檢測步驟，所述的富集步驟包括將待測水樣過濾處理后，向其中加入n種同位素提取內標，n為1以上22以下的整數，優選4～22，更優選4～16。。

本發明所述的測定方法，其特征在于，所述的富集步驟還包括將含有同位素凈化內標的水樣用固相萃取小柱進行富集，得到含有抗生素的萃取小柱，小柱優選親水親脂型固相萃取小柱。

本發明所述的測定方法，其特征在于，所述的富集步驟還包括老化步驟。

本發明所述的測定方法，其特征在于，所述的分離凈化步驟包括：將含有抗生素的萃取小柱用高純水清洗，抽真空1～2小時后甲醇進行洗脫，收集洗脫液，濃縮定容后得到凈化試樣。

本發明所述的測定方法，其特征在于所述的樣品檢測步驟用HPLC-MS/MS儀器對所述凈化試樣進行分析測定。

本發明所述的測定方法，其特征在于，所述的分離凈化步驟還包括：將得到的所述凈化試樣經濃縮后含0.025％甲酸的甲醇/水定容至500μL，加入13C-Atrazine的進樣內標后渦旋混合均勻，用0.22μm的尼龍針筒過濾器過濾后待測，其中甲醇與水的體積比為1：1。

本發明所述的測定方法，其特征在于，所述分析檢測步驟檢測條件采用HPLC-MS/MS儀器對所述凈化試樣分別進行分析測定，采用的測定參數為：

HPLC檢測條件為進樣體積10μL；柱溫40℃，色譜柱為C18液相色譜柱，規格為3.5μm×3.0mm×150mm，流動相為含0.01％甲酸的高純水和乙腈，流速為0.40mL/min，質譜條件為電噴霧電離源ESI，多反應監測模式MRM。

本發明所述的測定方法，其特征在于，所述的抗生素種類選自磺胺類、解熱止痛藥、四環素類、青霉素類、大環內酯類、林可酰胺類中任意一種以上。

本發明所述的測定方法，其特征在于，所述抗生素為，磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲異惡唑、磺胺二甲異嘧啶、磺胺甲氧噠嗪、磺胺喹噁啉、磺胺二甲嘧啶、磺胺間二甲氧嘧啶、磺胺甲惡唑、磺胺甲噻二唑、磺胺間甲氧嘧啶、對乙酰氨基酚、四環素、金霉素、青霉素G、紅霉素、克拉霉素、羅紅霉素、泰樂菌素、克林霉素、林可霉素。