[發明專利]一種鯉皰疹病毒II型的dsRNA及其應用

在審

• 申請號: 201610109702.2
• 申請日: 2016-02-26
• 公開（公告）號: CN105567693A
• 公開（公告）日: 2016-05-11
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 江蘇海健前沿生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/70;A61K48/00;A61K31/713;A61P31/22
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 耿曉岳

本發明公開了一種鯉皰疹病毒II型的dsRNA及其應用，屬于水產養殖技術領域。本發明從CYHV?II基因組中篩選得到了一段核苷酸序列，通過構建基因工程菌，表達得到相應的dsRNA，以所得dsRNA免疫鯽魚、金魚，能夠有效保護魚免受CYHV?II的侵害；具有巨大的市場應用價值。

技術領域

本發明涉及一種鯉皰疹病毒II型的dsRNA及其應用，屬于水產養殖技術領域。

背景技術

我國水產養殖業在近代得到了迅速發展，其中淡水魚養殖產量增長最快。鯉科魚類鯽魚作為我國淡水養殖的優良品種，除西部高原外，在全國各地均有分布，具有悠久的養殖和生長歷史以及極為豐富的資源。近十年來，我國鯽魚養殖的規模和潛力發展迅速，其年總產量現已達250萬噸，并呈穩步上漲趨勢，在淡水養殖中占據十分重要的地位。而由鯽魚進化而成的金魚，因其易于飼養、身姿奇異、色彩絢麗，深受人們的喜愛。

然而1992年秋和1993年春，日本西部養殖金魚發生皰疹病毒性造血器官壞死病大流行，死亡率幾乎達到100％，這是有關鯉皰疹病毒II型(CYHV-II)的首次報道(Jung SJetc,1995)。隨后在美國(GroffJ M etc,1998)、澳洲、新西蘭、歐洲等世界各國也陸續有該病發生。1995年我國臺灣進口的親本金魚導致繁殖金魚魚苗爆發性疾病，死亡率高達95％(Chang P H etc,1999)。2011年CYHV-II首次在匈牙利養殖的銀鯽體內被檢測到后，感染異育銀鯽的報道陸續增多。我國在2012年首次報道了異育銀鯽感染病例，隨后陸續在江蘇、北京、廣州、武漢等地養殖的異育銀鯽中也檢測到了CYHV-II，證實該病毒在我國已有較廣泛的分布(李麗娟等，2013)。異育銀鯽是江蘇水產養殖的主導產業，該病自射陽部分水產養殖場出現后，蔓延至大豐、鹽城、揚州等主要水產養殖區域，僅2012年全省鯽魚受災面積約45萬畝，其中絕收塘口面積約2.38萬畝，由此造成的水產品損失約2.96萬噸，直接經濟損失達4億元人民幣，給江蘇鯽魚養殖業帶來沉重打擊。2014年，CYHV-II導致僅江蘇省異育銀鯽主養殖區的經濟損失就高達30億元以上。

雖然CYHV-II僅感染金魚、鯽魚及其普通變種，但其具有較高的傳染性，魚卵、魚苗、成魚和親魚均可感染(Hedrik等，2006)，但更易于引起小于1齡幼魚的爆發性死亡(Groffet al,1998)，且被證實有垂直傳播的現象(Goodwin,2009)。該病主要發生在春秋季節，水溫15-25℃易發病(Jung etc,1995；Groffetc,1998)。目前對CYHV-II相關研究較少，且大多集中于流行病學和分子生物學診斷方法，缺乏有效的防治手段。

雙鏈核糖核酸(dsRNA)能夠高效特異性地抑制目的基因的表達，且抑制效率遠高于單鏈RNA，這種效應稱之為RNAinterference(RNAi)?？茖W家在不同物種里面均發現RNAi效應表明RNAi是在大部分真核生物里都存在的一種保守作用機制。目前RNAi技術已被廣泛應用于基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的治療領域，在人類病毒性疾病領域的研究證實，RNAi能夠勝任許多病毒病的基因治療，未來或將成為一種有效的抗病毒治療手段。

發明內容

本發明的目的在于提供一種CYHV-II的dsRNA，能夠防止CYHV-II侵害鯽(金)魚。

為實現上述發明目的，本發明提供的dsRNA的單鏈核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明還提供一種獲得所述dsRNA的方法，是以CYHV-II基因組為模板，設計引物擴增得到SEQ ID NO.2所示的核苷酸，并通過構建基因工程菌表達SEQ ID NO.2所示的核苷酸，再從基因工程菌中提取得到所述dsRNA。

在本發明的一種實施方式中，以Escherichia coli HT115(DE3)為宿主表達得到所述dsRNA。