[發明專利]用于治療血管性癡呆的干細胞制劑及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201610109284.7
• 申請日: 2016-02-28
• 公開（公告）號: CN105749254A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 曾憲卓;魯菲
• 申請（專利權）人: 深圳愛生再生醫學科技有限公司
• 主分類號: A61K38/38
• 分類號: A61K38/38;A61P25/28;A61K38/18;A61K35/28;A61K31/7072
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及細胞工程技術領域，特別涉及一種用于治療血管性癡呆的干細胞制劑及其制備方法和應用。

背景技術

血管性癡呆(VaD)是老年期癡呆的主要類型之一，是由一系列腦血管因素導致腦組織損害引起的以認知功能障礙為特征的綜合征。臨床主要表現為認知功能減退，嚴重者精神行為異常，影響患者的生活質量。隨著社會老齡化的到來和腦血管病發病率的增高，血管性癡呆的發病率逐漸上升，而目前血管性癡呆的治療尚無針對性特效藥物。

干細胞是一類具有分化潛能的原始細胞，在適當條件下可以向特定的成熟組織細胞分化。具有神經細胞分化潛能的細胞主要有三種類型：胚胎干細胞、神經干細胞和成體細胞。胚胎干細胞存在一定的社會倫理道德問題，神經干細胞的獲得需體外分離動物胚胎或成熟中樞神經系統的細胞，并利用含有特殊生長因子的條件培養基維持神經干細胞的未分化狀態，操作繁瑣，且神經干細胞復雜的定位決定它很難大量獲得并應用于臨床，而成體干細胞一旦加以適合神經分化的刺激，在體內、體外均可分化為神經細胞。成體干細胞包括神經干細胞、造血干細胞、骨髓間充質干細胞、表皮干細胞等。在成體干細胞中，骨髓間充質干細胞由于其取材方便、來源豐富而成為用于移植治療中樞神經系統疾病的研究熱點之一。

骨髓間充質干細胞(BMSCs)是存在于骨髓中的一類非造血干細胞，其具有強大的增殖和多向分化的潛能，免疫原性低，并能在體內外分化為神經元樣細胞、肌細胞和成骨細胞等，對于治療神經系統疾病的研究有著重要的意義。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，針對現有技術中用于治療血管性癡呆的藥物療效差等缺陷，提供一種能夠提高血管性癡呆療效的用于治療血管性癡呆的干細胞制劑及其制備方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種用于治療血管性癡呆的干細胞制劑，包括骨髓間充質干細胞、Brdu、表皮生長因子、成纖維細胞生長因子和人血白蛋白磷酸緩沖液。

在本發明提供的用于治療血管性癡呆的干細胞制劑中，所述干細胞制劑中，所述干細胞制劑中，所述骨髓間充質干細胞的濃度為(1～3)×10⁶個/ml。

在本發明提供的用于治療血管性癡呆的干細胞制劑中，所述干細胞制劑中，

Brdu的濃度為5～15μmol/L、

表皮生長因子的濃度為2～10μg/ml、

成纖維細胞生長因子的濃度為2～20μg/ml，

以及人血白蛋白緩沖液的質量分數為0.5～2.0％。

在本發明提供的用于治療血管性癡呆的干細胞制劑中，所述干細胞制劑中，

骨髓間充質干細胞的濃度為2×10⁶個/ml、

Brdu的濃度為10μmol/L、

表皮生長因子的濃度為6μg/ml、

成纖維細胞生長因子的濃度為11μg/ml，

以及人血白蛋白緩沖液的質量分數為1％。

在本發明提供的用于治療血管性癡呆的干細胞制劑中，所述人血白蛋白緩沖液是由人血清白蛋白原液和PBS緩沖液混合制成的。

在本發明提供的用于治療血管性癡呆的干細胞制劑中，所述人血白蛋白緩沖液中，人血清白蛋白原液和PBS緩沖液的體積比為(0.5～2)：1。

本發明進一步保護上述用于治療血管性癡呆的干細胞制劑的制備方法，

獲取骨髓間充質干細胞的過程包括以下步驟：

采集骨髓，肝素抗凝，在percoll分離液中離心，取中層單核細胞，PBS緩沖液離心洗滌，棄上清液，即收獲原代骨髓間充質干細胞；

將原代骨髓間充質干細胞濃度調整至1×10⁶～1×10⁸個/25ml，加入血清培養基進行培養；當細胞生長至融合時，PBS漂洗，加入胰蛋白酶，見胞質回縮，細胞間隙增大后，加入含胎牛血清的DMEM培養基終止消化，按1：2～1：3比例接種進行傳代培養至細胞生長到融合，繼續傳代至獲得第3～5代中任一代骨髓間充質干細胞，胰酶消化后，離心清洗。

在本發明提供的用于治療血管性癡呆的干細胞制劑的制備方法中，所述血清培養基中添加有10^-6～10^-8mol/L的氫化可的松、80-120U/ml的青霉素及80-120mg/ml的鏈霉素。

本發明進一步保護上述干細胞制劑在制備治療血管性癡呆的藥物中的應用。