[發明專利]一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物及其制備和應用

在審

• 申請號: 201610109012.7
• 申請日: 2016-02-26
• 公開（公告）號: CN105670303A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 史向陽;邱潔茹;孔令丹;李愛軍;曹雪雁
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C08L87/00
• 分類號: C08L87/00;C08K3/08;C08G81/00;C08G83/00;C08B37/16;C12N15/87
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

技術領域

本發明屬于納米復合物及其制備和應用領域，特別涉及一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分 子/金納米顆粒復合物及其制備和應用。

背景技術

RNA干擾(RNAi)是指由與靶基因序列同源的雙鏈RNA(dsRNA)引發而導致特異性 基因轉錄后出現基因沉默的現象。在細胞內，dsRNA特異性的核酸酶將其裂解成不超過21-25 個核苷酸的小干擾RNA(siRNA)，隨后介導特異性的mRNA發生降解，導致相應基因表達 被阻斷而引起基因沉默。該技術已被廣泛應用于基因治療的研究中。

基因治療作為一種現代醫學和分子生物學相結合而誕生的新技術，是通過將外源正常基 因導入靶細胞內，用以糾正或補償基因缺失或異常引起的疾病，從而進行疾病治療。然而， 目前基因治療最主要的障礙就是缺乏一種安全有效的載體。在基因載體系統中，主要借助病 毒和非病毒載體將外源基因導入靶細胞。病毒載體轉染效率高，但臨床應用的安全隱患制約 了其進一步的應用。而非病毒載體，由于其低細胞毒性、無免疫原性、易操作和高基因裝載 量等特點，越來越受到研究者們的關注。

非病毒載體中，聚酰胺胺樹狀大分子(PAMAM)是目前研究最深入的樹狀大分子之一， 它獨特的高度支化三維立體結構令其成為一種新型的高分子載體被廣泛應用于基因傳遞中。 研究表明，PAMAM的基因轉染效率和細胞毒性會隨著其代數的增加而增加。而第五代(G5) PAMAM雖然有一定的毒性，但可以通過內部包裹納米金顆粒[Shan,Y.,Luo,T.,etal.,Gene deliveryusingdendrimer-entrappedgoldnanoparticlesasnonviralvectors[J].Biomaterials,2012, 33(10):p.3025-3035]或進行表面修飾[史向陽，侯文秀，郭睿，孔令丹.包裹納米金顆粒的PEG 功能化的PAMAM樹狀大分子載體的基因轉染方法[P].中國專利：201310728846.2，2014-04-09] 等手段降低其細胞毒性并增強轉染能力。

Wang等[Wang,H.,N.Shao,etal.,Host-guestchemistryofdendrimer-cyclodextrin conjugates:Selectiveencapsulationsofguestswithindendrimerorcyclodextrincavitiesrevealedby NOENMRtechniques[J].JPhysChemB,2012,116(36):p.11217-11224.]證明，將環糊精分子共 價連接到G5PAMAM表面，可以增強G5PAMAM的水溶性及細胞攝入率。 檢索國內外相關文獻和專利結果表明：以β-CD修飾的樹狀大分子及其納米金顆粒為載體，負 載siRNA用于惡性膠質瘤細胞(U87MG)基因轉染的方法，尚未見報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合 物及其制備和應用，本發明制備過程簡單，實驗條件溫和，易操作；本發明所得復合物具有 較好的生物相容性及基因轉染效率。

本發明的一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物，所述復合物為β-環糊精 β-CD與第五代聚酰胺-胺樹狀大分子表面氨基基團共價結合并負載金納米顆粒。

本發明的一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物的制備方法，包括：

(1)分別將N,N’-羰基二咪唑CDI和β-環糊精β-CD溶解于溶劑中，混勻4-6h，得到混合 液，然后向混合液中逐滴加入第五代聚酰胺-胺樹狀大分子G5.NH₂溶液，繼續室溫攪 拌1-3天，經透析，冷凍干燥，得到白色粉末G5.NH₂-β-CD；其中CDI與β-CD的摩 爾比為5：1～10：1，β-CD與G5.NH₂的摩爾比為25：1；