[發明專利]一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物及其制備和應用

在審

• 申請號: 201610109012.7
• 申請日: 2016-02-26
• 公開（公告）號: CN105670303A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 史向陽;邱潔茹;孔令丹;李愛軍;曹雪雁
• 申請（專利權）人: 東華大學
• 主分類號: C08L87/00
• 分類號: C08L87/00;C08K3/08;C08G81/00;C08G83/00;C08B37/16;C12N15/87
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 黃志達

1.一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物，其特征在于：所述復合物為β-環 糊精β-CD與第五代聚酰胺-胺樹狀大分子表面氨基基團共價結合并負載金納米顆粒。

2.一種如權利要求1所述的β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物的制備方法， 包括：

(1)分別將N,N’-羰基二咪唑CDI、β-環糊精β-CD溶解于溶劑中后，混勻4-6h，得到混合 液，然后向混合液中逐滴加入第五代聚酰胺-胺樹狀大分子G5.NH₂溶液，繼續室溫攪 拌1-3天，經透析，冷凍干燥，得到G5.NH₂-β-CD；其中CDI與β-CD的摩爾比為5:1-10:1， β-CD與G5.NH₂的摩爾比為25:1；

(2)在攪拌條件下，將G5.NH₂-β-CD的水溶液中逐滴加入氯金酸水溶液，反應20-30min， 然后加入硼氫化鈉NaBH₄的冰水溶液，繼續反應2-4h，透析，冷凍干燥，得到β-環糊 精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物AuDENPs-β-CD；其中G5.NH₂與 HAuCl₄·4H₂O的摩爾比為1：25，HAuCl₄·4H₂O與NaBH₄的摩爾比為1：5～1：10。

3.根據權利要求2所述的一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物的制備方 法，其特征在于：步驟(1)中的溶劑為二甲基亞砜DMSO。

4.根據權利要求2所述的一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物的制備方 法，其特征在于：步驟(1)中N,N’-羰基二咪唑CDI溶解于溶劑后的濃度為111.36μmol/mL， β-環糊精β-CD溶解于溶劑后的濃度為11.14μmol/mL；第五代聚酰胺-胺樹狀大分子 G5.NH₂溶液的濃度為0.44μmol/mL；第五代聚酰胺-胺樹狀大分子G5.NH₂溶液的溶劑為 二甲基亞砜DMSO。

5.根據權利要求2所述的一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物的制備方 法，其特征在于：步驟(2)中氯金酸水溶液的濃度為30mg/mL；硼氫化鈉NaBH₄的冰 水溶液濃度為10mg/mL。

6.根據權利要求2所述的一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物的制備方 法，其特征在于：步驟(1)、(2)中透析均為：使用的透析袋截留分子量為8000-14000； 用PBS緩沖溶液透析1天后更換超純水透析2天，每天3次，每次2L。

7.一種如權利要求1所述的β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物的應用，其特 征在于：β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物AuDENPs-β-CD作為非病毒 載體負載siRNA進行基因轉染的應用。

8.根據權利要求7所述的一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物的應用，其 特征在于：AuDENPs-β-CD作為載體應用于惡性膠質瘤細胞U87MG基因轉染，具體為： 按照不同N/P比，取無菌水分別稀釋AuDENPs-β-CD及siRNA，而后均勻混合，于37℃ 條件孵育15-30min，得到不同N/P比的AuDENPs-β-CD/siRNA復合物；將U87MG細胞 于37℃、5％CO₂培養24h，更換無血清的DMEM培養基，加入不同N/P比的Au DENPs-β-CD/siRNA復合物溶液，37℃培養4h；其中N/P比為第五代聚酰胺-胺樹狀大分 子的表面氨基基團與siRNA骨架上磷酸基團摩爾比。

9.根據權利要求8所述的一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物的應用，其 特征在于：所述siRNA為B淋巴細胞瘤-2(Bcl-2)siRNA或血管內皮生長因子VEGF siRNA。

10.根據權利要求8所述的一種β-環糊精/聚酰胺-胺樹狀大分子/金納米顆粒復合物的應用，其 特征在于：不同N/P比分別為2.5：1、5：1和10：1。