[發明專利]淀粉樣蛋白的檢測方法

有效

• 申請號: 201610108749.7
• 申請日: 2016-02-26
• 公開（公告）號: CN105651752B
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 楊延蓮;黃歡;李平;王琛
• 申請（專利權）人: 國家納米科學中心
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

本發明涉及一種淀粉樣蛋白的檢測方法。具體而言，本發明是以碳基量子點為熒光探針，利用碳基量子點獨特的結構和發光特性而實現的。本發明不僅為淀粉樣蛋白聚集檢測提出了新的方案，并且避免了傳統熒光檢測方法中對待測體系造成的干擾。

技術領域

本發明涉及淀粉樣蛋白的檢測方法，尤其涉及利用碳基量子點檢測淀粉樣蛋白的方法，涉及蛋白結構檢測領域。

背景技術

淀粉樣變性的發生源自蛋白質的錯誤折疊，以沉淀的形式沉積在身體組織或器官，并直接導致阿爾茲海默癥、帕金森綜合癥、瘋牛病等病癥(Cell,2012,148,1188.)。淀粉樣蛋白具體聚集過程如下，溶液中蛋白質發生錯誤折疊，向β-片層結構發生轉變，繼而組裝成具有生理毒性的極小寡聚體與彌散型小寡聚體、環形原纖維、原纖維、纖維，最終形成斑塊。如檢測跟蹤淀粉樣蛋白結構的改變，是當今研究熱點，目前，硫黃素T和剛果紅是最常用檢測該過程的熒光探針(Nature.2011,472,226.)。然而，這些方法在檢測過程中會對體系產生干擾。為了探究更多的檢測方法，多種納米材料如：金納米顆粒、聚集誘導發光分子和光子晶體(Chem.Commun.,2015,51,1866.)等受到了廣泛研究。然后這些材料的制備過程繁瑣且生物相容性一般，為臨床應用帶來了很大的不便。

發明內容

本發明的目的是提供一種利用碳基量子點檢測淀粉樣蛋白的方法，該檢測方法可有效檢測淀粉樣蛋白含量，還可有效檢測淀粉樣蛋白聚集動力學行為。本發明方法簡便、成本低，成本低且碳基量子點材料生物相容性好；檢測過程對體系不產生干擾；解決了現今檢測方法單一、檢測過程引入干擾的技術瓶頸。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：

本發明首先提供碳基量子點在淀粉樣蛋白檢測上的應用。

所述應用至少包括用于檢測淀粉樣蛋白的凝聚構象，用于檢測淀粉樣蛋白聚集動力學，或用于檢測淀粉樣蛋白含量等。

本發明還提供一種檢測淀粉樣蛋白的凝聚構象的方法，所述方法包括：

1)將待確定凝聚構象的淀粉樣蛋白與碳基量子點相結合，獲得其光譜特征；

2)將已知凝聚構象的淀粉樣蛋白與碳基量子點相結合，獲得預定光譜特征；

通過比較步驟1)和步驟2)所得的光譜特征，確定所述待確定凝聚構象的淀粉樣蛋白的凝聚構象；其中所述光譜特征是用熒光光譜法評估的。

優選地，所述已知凝聚構象包括纖維狀構象。

本發明還提供一種檢測淀粉樣蛋白聚集動力學的方法，所述方法包括將碳基量子點與孵育不同時間的淀粉樣蛋白溶液進行混合，根據碳基量子點熒光強度的變化，檢測淀粉樣蛋白的聚集動力學行為。

具體地，上述檢測淀粉樣蛋白聚集動力學的方法，包括以下步驟：

1)將淀粉樣蛋白粉末配成完全溶解的有機溶液，恒溫孵育一段時間后，氮氣吹干，分散在超純水中形成一定濃度的淀粉樣蛋白水溶液；之后，將樣品置于搖床中，恒溫、恒速老化；

2)每隔一定時間從上述溶液中取出定量樣品，滴入細胞培養板(如96孔板)，并加入碳基量子點溶液，混合均勻；優選每次至少取三組平行樣品進行實驗；每次取點后，淀粉樣蛋白原液都放回搖床；

3)將細胞培養板(如96孔板)中的混合液置于熒光光譜儀中，設定激發和發射波長，測定相應時間碳基量子點的熒光強度；

4)以時間為橫坐標，熒光強度為縱坐標，繪制碳基量子點的熒光強度隨時間變化趨勢圖，對數據進行擬合，得到碳量子點檢測的淀粉樣蛋白聚集行為動力學曲線。

上述檢測淀粉樣蛋白聚集動力學的方法，其中

步驟1)所述有機溶液為六氟異丙醇(HFIP)。