[發(fā)明專利]淀粉樣蛋白的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610108749.7
• 申請(qǐng)日: 2016-02-26
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105651752B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-04-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊延蓮;黃歡;李平;王琛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 國(guó)家納米科學(xué)中心
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種檢測(cè)淀粉樣蛋白含量的方法，其特征在于，該方法是以碳基量子點(diǎn)作為探針的熒光光譜檢測(cè)方法；包括標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、樣品待測(cè)液的制備和快速檢測(cè)；

所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制包括以下步驟：

1）制備1 mg/mL 的碳基量子點(diǎn)溶液；

2）將Aβ粉末配成1mg/mL的溶液，溶劑為六氟異丙醇，37℃孵育3小時(shí)后，氮?dú)獯蹈桑?%體積含量的二甲基亞砜為助溶劑，分散在超純水中形成濃度分別為50 mg/mL，100 mg/mL，150 mg/mL，200 mg/mL，250 mg/mL，300 mg/mL的6份Aβ單體溶液；取該6份Aβ單體溶液各100微升，分別與100 微升1 mg/mL 的碳基量子點(diǎn)溶液在96孔板中混合；之后，置于熒光光譜儀中，測(cè)定碳基量子點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)為400 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為500 nm；以Aβ單體含量mg/mL為橫坐標(biāo)，熒光強(qiáng)度值為縱坐標(biāo)，繪制Aβ單體標(biāo)準(zhǔn)曲線；

其線性回歸方程為Y＝ax+b，相關(guān)系數(shù)R 為0.9557，其中x 代表Aβ單體的濃度mg/mL，Y代表熒光強(qiáng)度值；a=-5.2，b=1829.5；

所述樣品待測(cè)液的制備包括以下步驟：

將待測(cè)樣品經(jīng)適當(dāng)處理，去除干擾物質(zhì)后，保留淀粉樣蛋白，從而獲得樣品待測(cè)液；

所述快速檢測(cè)包括以下步驟：

1）制備1 mg/mL 的碳基量子點(diǎn)溶液；

2）取上述樣品待測(cè)液100微升與100 微升1 mg/mL 的碳基量子點(diǎn)溶液在96孔板中混合；之后，置于熒光光譜儀中，測(cè)定碳基量子點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，設(shè)定激發(fā)波長(zhǎng)為400 nm，發(fā)射波長(zhǎng)為500 nm；同時(shí)做空白對(duì)照試驗(yàn)，按下式計(jì)算待檢樣品中Aβ單體含量：

x=(I-I₀)/a

其中，x為待測(cè)樣品中Aβ單體含量，I為待測(cè)樣品的熒光強(qiáng)度數(shù)值，I₀為空白量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度數(shù)值，a為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率數(shù)值-5.2；

3）將正常樣品中Aβ單體含量與所得待檢樣品中Aβ單體含量進(jìn)行比較，獲得待檢樣品中異常淀粉樣蛋白的含量。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟3）包括通過(guò)上述方法獲得正常樣品中Aβ單體含量x₀，與待檢樣品中Aβ單體含量x比較，得到待檢樣品中異常淀粉樣蛋白的含量為x₀-x。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述樣品待測(cè)液包括腦脊液、血液。