[發明專利]一種藻油DHA提取制備方法

在審

• 申請號: 201610108615.5
• 申請日: 2016-02-26
• 公開（公告）號: CN105670771A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 于榮賢;劉兵;余玉芳;張勇;李建;方翠;孫小玲;孫會喜
• 申請（專利權）人: 深圳市榮格保健品有限公司
• 主分類號: C11B1/04
• 分類號: C11B1/04;C11B1/10;C11B3/00;C11B3/10;C11B3/12
• 代理公司: 佛山市廣盈專利商標事務所(普通合伙) 44339
• 代理人: 楊樂兵;楊琳

1.一種藻油DHA提取制備方法，其特征在于，包含如下步驟：

(1)將寇氏隱甲藻進行培養和發酵；所述培養和發酵為藻種培養和異養發 酵，得到微藻原料；

(2)干燥；將步驟(1)得到的微藻原料進行干燥處理，得到微藻粉末；

(3)破壁預處理；將步驟(2)得到的微藻粉末采用超聲處理法進行微藻 破壁預處理，得到微藻干粉；

(4)微藻DHA提取；將步驟(3)得到的微藻干粉采用索氏提取法和/或超 臨界二氧化碳萃取法進行微藻DHA提取，得到微藻油脂；

(5)尿素包合富集純化；將步驟(4)得到的微藻油脂通過尿素包合法富 集純化DHA；得到微藻DHA藻油；

(6)脫色除臭；將尿素包合富集純化所得的微藻DHA藻油加入占油體質量 3％的活性白土進行脫色，脫色溫度為80℃，脫色時間為45分鐘，同時抽真空并 適度攪拌，過濾除去白土，對油脂進行水蒸氣氣提除臭，汽提溫度為85℃，真 空度為0.30Kpa，脫臭時間為1小時，然后維持真空狀態下緩慢冷卻，離心得藻 油DHA成品。

2.如權利要求1所述的一種藻油DHA提取制備方法，其特征在于，所述步 驟(1)包含準備培養基以及異氧發酵的過程；

所述準備培養基包含,

(S11)固體培養基：

培養基組成：葡萄糖50g，味精30g，酵母膏6g，氯化鈉8g，磷酸二氫鉀 2g，硫酸鎂6g，無水氯化鈣0.5g，碳酸氫鈉0.2g，A5溶液1ml，土浸液2ml， 純凈水1000ml；瓊脂2％；

(S12)一級種子培養基：

培養基組成：葡萄糖20g，味精10g，酵母膏2g，氯化鈉8g，磷酸二氫鉀 2g，硫酸鎂6g，無水氯化鈣0.5g，碳酸氫鈉0.2g，A5溶液1ml，土浸液2ml， 純凈水1000ml；

(S13)二級種子培養基：

培養基組成：葡萄糖40g，味精20g，酵母膏4g，氯化鈉8g，磷酸二氫鉀 2g，硫酸鎂6g，無水氯化鈣0.5g，碳酸氫鈉0.2g，A5溶液1ml，土浸液2ml， 純凈水1000ml；

(S14)發酵培養基：

培養基組成：葡萄糖50g，味精30g，酵母膏6g，氯化鈉8g，磷酸二氫鉀 2g，硫酸鎂6g，無水氯化鈣0.5g，碳酸氫鈉0.2g，A5溶液1ml，土浸液2ml， 純凈水1000ml；

(S15)菌種保藏培養基：

所述固體培養基或發酵培養基中添加有青霉素，添加量為50～100mg/L，并 低溫保藏。

3.如權利要求2所述的一種藻油DHA提取制備方法，其特征在于：所述菌 種保藏培養基為用于保藏寇氏隱甲藻的固體培養基。

4.如權利要求2所述的一種藻油DHA提取制備方法，其特征在于：所述異 養發酵包含如下步驟，

(S21)一級種子培養：

從固體培養基的平板上取一定量純的寇氏隱甲藻，接種到一級種子培養基， 置于搖床上，28℃、120rpm條件下培養48小時，得到一級種子；

(S22)二級種子培養：

將一級種子按20％的接種量轉接到二級種子培養基，28℃、150rpm條件下 培養48小時，得到二級液體種子；

(S23)發酵培養：

取5L標準發酵罐，自動調控溫度、pH、溶氧、攪拌速度、通風量和流加 速度；發酵條件為：將二級液體種子按4％接種量接種于發酵培養基中，在25℃ 和4L/min的通氣量下培養；每12h取樣，測定葡萄糖濃度、生物量；每24h 測定脂肪酸和DHA含量；通過流加2mol/LHCl或2mol/LNaOH自動控制發酵液 pH。