[發明專利]一種HPV16型E7蛋白的檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201610107596.4
• 申請日: 2016-02-26
• 公開（公告）號: CN106610378A
• 公開（公告）日: 2017-05-03
• 發明（設計）人: 苗進超
• 申請（專利權）人: 弗雷米德生物醫藥技術（天津）有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76;G01N33/68
• 代理公司: 天津濱?？凭曋R產權代理有限公司12211
• 代理人: 張會雪

技術領域

本發明涉及一種檢測試劑盒，特別涉及一種HPV16型E7蛋白的檢測試劑盒。

背景技術

宮頸癌是在女性中第二常見的癌癥診斷，并且在99.7％的情況下與高危人乳頭瘤病毒感染相關，全世界每年有約400000例宮頸癌，近200000人死亡。HPV有超過100種不同的分離株，已根據它們與宮頸癌或與良性宮頸病變或非典型增生的關聯性被寬泛地再分成高危和低危亞型。低危險型HPV包括HPV6、11、42、43、44等，常引起外生殖器濕疣等良性病變包括宮頸上皮內低度病變(CIN I)，高危險型HPV包括HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，CP8304等亞型，與宮頸癌及宮頸上皮內高度病變(CIN II/III)的發生相關，尤其是HPV16和18型，其中HPV16占50％以上。

人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一種嗜上皮性病毒，共有3個基因區組成，包括早期區(Early Region，E區)、晚期區(Late Region，L區)與非編碼區(Uncoding Region，UCR)或上游調控區(URR)。E區按順序為E6、E7、E1、E2、E3、E4和E5共7個基因，參與病毒DNA的復制、轉錄、編碼病毒蛋白、維持細胞內病毒的高拷貝數的基因，其中E6和E7是HPV的主要致癌基因，與病毒細胞轉化功能及致癌性有關。E6和E7蛋白使腫瘤阻抑蛋白p53和pRB鈍化，分別解除細胞周期控制和抑制細胞凋亡。因此，用于測定腫瘤中的HPV狀態的最佳方法是測量腫瘤細胞中的E6/E7蛋白。

目前人乳頭瘤病毒(HPV)的主要檢測方法包括原位雜交，DNA直接捕捉法和各類PCR方法。上世紀90年代中期在傳統的PCR基礎上發展起來的實時熒光定量PCR(qPCR,Real-time Quantitative PCR)技術實現了PCR從定性到定量的飛躍，以其特異性強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應等優點成為了分子診斷研究中的重要工具。

但是上述方法只是在基因水平上檢測是否感染了人乳頭瘤病毒(HPV)，至于相關致癌蛋白的表達與否，實時熒光定量PCR技術并不能給出準確的判斷，而且該方法需要配套儀器實時熒光定量PCR儀，價格昂貴，檢測成本高。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供了用于檢測高危型人乳頭瘤病毒(HPV)16亞型E7致癌蛋白的化學發光檢測試劑盒。宮頸脫落細胞裂解后直接加樣，直接檢測高危型HPV相關致癌蛋白的表達與否以及表達量，從而對于高危型HPV的感染程度有了明確的判斷，方便了后續的治療。這一點恰恰正是目前檢測方法(包括實時熒光定量PCR技術)不能媲美的。

本發明試劑盒采用雙抗體夾心法，使用抗體檢測人體宮頸脫落細胞中的高危型HPV16型E7蛋白。先將宮頸脫落細胞裂解后，直接加入包被了特異性抗體的化學發光板中，經溫育和洗滌后，加入酶標抗體，再經溫育和洗滌后加入底物，用化學發光儀檢測發光值。發光值與E7蛋白含量呈正相關，由此實現對人體宮頸脫落細胞中的HPV16型E7蛋白的定量檢測。

本發明采用的技術方案為：

本發明提供了一種HPV16型E7蛋白檢測的化學發光板，該化學發光板包被有HPV16型E7抗體。

優選地，該化學發光板的每個微孔內抗體的包被量為0.05～0.5μg。