[發明專利]基于高效液相色譜法檢測卷煙煙氣中角鯊烯的方法

在審

• 申請號: 201610107551.7
• 申請日: 2016-02-29
• 公開（公告）號: CN105758951A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 金亞波;王全;盧健;韋建玉;胡亞杰;張紀利;黃忠向;萬樹青;陳澤鵬
• 申請（專利權）人: 廣西中煙工業有限責任公司;華南農業大學;中國煙草總公司廣東省公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 任重

技術領域

本發明涉及卷煙煙氣中成分的檢測技術領域，更具體地，涉及一種基于高效液相色譜法檢測卷煙煙氣中角鯊烯的方法。

背景技術

角鯊烯最初是從鯊魚的肝油中發現的，1914年被命名為Squalene,其化學名稱為2,6,10,15,19,23--六甲基--2,6,10,14,18,22--二十四碳六烯，屬開鏈三萜類化合物。

角鯊烯具有提高人體內超氧化物歧化酶(SOD)活性、增強機體抗氧化性和免疫能力、改善性功能、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤等多種生理功能，是一種無毒性的具有防病治病作用的生物活性物質。最近研究發現角鯊烯對人體還具有解毒作用，可移除組織中的脂溶性毒素。已有研究表明：在煙絲中添加一定量的角鯊烯，可降低煙氣中幾種有害物質和自由基含量，表明角鯊烯具有獨特降害作用，目前開發利用角鯊烯已成為科技界和煙草業研究的熱點。

2014年4月，國家煙草專賣局下發關于加快卷煙降焦減害技術成果推廣應用的通知(國煙辦綜[2014]218號)，提出要加大卷煙減害技術重大專項研究成果的應用推廣力度，要采取針對性技術措施加快卷煙降焦減害步伐。為了配合國家局加快卷煙降焦減害步伐的重大決策，本申請人在完成中國煙草總公司2013年度科技面上項目《廣西主流煙氣天然抗氧化劑角鯊烯的生態累積與減害研究》(中煙辦[2013]149號)研究基礎上，迫切需要建立一種可行的適于標準的主流煙氣角鯊烯含量的檢測方法。

但是，目前國內外還沒有可參考的煙氣中尤其是主流煙氣中角鯊烯定性和定量的檢測方法，因此，在煙草行業建立烤煙中角鯊烯定性和定量的檢測方法具有前瞻性，也是十分必要的。而在煙氣中角鯊烯的檢測中，良好的樣品前處理方法對獲得準確科學的檢測結果起到關鍵性作用。在確定的檢測條件下，采用不同提取劑提取樣品中角鯊烯，其提取效率、提取操作用時等因素都是必須考慮的重要因素，各個因素之間又是相互影響的關系，目前未見基于高效液相色譜法檢測煙葉中角鯊烯的研究報道。

發明內容

本發明要解決的技術問題是填補現有煙氣中角鯊烯的檢測技術不足，提供一種基于高效液相色譜法檢測卷煙煙氣中角鯊烯的方法。

本發明的技術方案通過以下技術方案予以實現：

提供一種基于高效液相色譜法檢測卷煙煙氣中角鯊烯的方法，包括以下步驟：

以甲醇和乙腈為流動相，采用填有粒徑5μm的高效固定相的柱色譜分離技術，精確吸取10μL待測樣品液注入高效液相色譜儀進行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于210nm波長處檢測角鯊烯的吸收值，采用外標法，根據吸收峰面積計算其含量。

所述高效液相色譜法檢測主流煙氣中所含角鯊烯的方法包括以下步驟：

S1.樣品經前處理得到樣品液；

S2.配制標準溶液，建立標準曲線；

S3.檢測：取樣品液注入高效液相色譜儀檢測；

S4.采用外標法，根據吸收峰面積計算角鯊烯含量。

所述檢測的檢測條件為：

(1)高效液相色譜儀HPLC(Agilent1100)配紫外檢測器；

(2)色譜柱：C18柱，5μm，4.6×250mm；

(3)柱溫：20℃；

(4)流動相類型：甲醇∶乙腈(V：V＝70：30)；

(5)流動相流速：0.8mL/min；

(6)檢測波長為：210nm；

(7)進樣量：10μL；

步驟S2所述配制標準溶液的方法是準確稱取0.1g角鯊烯標準品，精確至0.0001g，用乙腈(色譜純)溶解后定容至100mL配制成1000mg/L的角鯊烯標準溶液，充分振蕩搖勻。所配標準溶液置于4℃保存，待用。

步驟S2所述角鯊烯標準曲線的建立的方法是：采用系列稀釋法，分別配制成濃度為0.002，0.01，0.05，0.2，0.5mg/mL的角鯊烯標準溶液于高效液相色譜進樣檢測；以進樣濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標建立標準曲線，求出角鯊烯濃度與相應峰面積的線性回歸方程。

其中，步驟S1包括以下步驟：

S11.收集煙氣固粒相物并提取：抽吸卷煙，采用濾片收集煙氣固粒相物；

S12.提取：將收集了煙氣固粒相物劍橋濾片放入錐形瓶中，加入提取劑，常溫下振蕩提取，得提取液；

S13.凈化：取步驟S12所得提取液，經過再處理后得到的溶液再經過柱，丙酮洗脫，收集洗脫液，旋轉蒸發至干，用色譜乙腈定容，過0.22μm濾膜即得待測樣品液；

其中，步驟S12所述提取劑為丙酮或氯仿；