[發(fā)明專利]一種飼料添加劑中紐甜含量的高效液相色譜測(cè)定方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610107521.6
• 申請(qǐng)日: 2016-02-26
• 公開（公告）號(hào): CN105651893A
• 公開（公告）日: 2016-06-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 凌滿;侯玲玲;王芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 重慶民泰香料化工有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 重慶博凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 50212
• 代理人: 李華華;張先蕓

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于飼料添加劑中成分分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種飼料添加劑中紐 甜含量的高效液相色譜測(cè)定方法。

背景技術(shù)

高效液相色譜法是一項(xiàng)高壓、高效、高靈敏度的分離技術(shù)，可用于分離分析高沸 點(diǎn)、相對(duì)分子量大、難揮發(fā)的有機(jī)化合物，廣泛應(yīng)用于化學(xué)、化工、高分子、生物、食品、醫(yī)藥 等領(lǐng)域。

紐甜，化學(xué)名稱是N-[N-(3,3—二甲基丁基)-L-α-天冬氨酰]-L-苯丙氨酸-1-甲 酯，白色結(jié)晶粉末，含約4.5％的結(jié)晶水，是一種功能性甜味劑，其具有純正的甜味，甜味協(xié) 和，十分接近阿斯巴甜，沒有其他強(qiáng)力甜味劑常帶的苦味和金屬味，甜度比蔗糖甜7000～ 13000倍，比阿斯巴甜甜30～60倍，紐甜在常溫(25℃)下水中的溶解度為12.6g/L，此溶解度 能完全滿足正常的生產(chǎn)需要。

在飼料添加劑領(lǐng)域，紐甜純凈的甜味，沒有苦、澀、金屬的異味，可有效地遮蔽糖精 的后苦等特征，因而紐甜可用于配制飼料甜味劑，通常將紐甜以及其他有效成分加入到二 氧化硅和/或蛭石等載體中混合均勻制備成所需產(chǎn)品。然而，目前飼料添加劑中紐甜含量的 檢測(cè)沒有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，也沒有現(xiàn)成的方法。《GB/T29944-2013食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品添加劑 紐甜》規(guī)定了食品中紐甜含量的檢測(cè)方法，但其不適用于混合型飼料添加劑中紐甜含量的 檢測(cè)，該標(biāo)準(zhǔn)適用于以阿斯巴甜和3,3-二甲基丁醛為主要原料，在氫氣存在下甲醇溶液中 進(jìn)行反應(yīng)而制得的紐甜，采用高效液相色譜法外標(biāo)單點(diǎn)進(jìn)行定量，適用于大濃度下紐甜含 量的檢測(cè)，而飼料添加劑中紐甜含量低，采用該標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)產(chǎn)生的誤差大，故不能用于飼料添 加劑中甲酸的定量測(cè)定。《GB/T23378-2009食品中紐甜的測(cè)定方法高效液相色譜法》，該標(biāo) 準(zhǔn)提供了一種定量檢測(cè)紐甜的方法，但該方法在樣品處理過程中采用固相萃取柱，過程復(fù) 雜，工作量大，不適用于大批量檢測(cè)；流動(dòng)相采用走梯度方式，液相采用二元泵，而對(duì)于液相 只有單泵的企業(yè)，并不適用。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的上述不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是：怎樣提供一種飼 料添加劑中紐甜含量的高效液相色譜測(cè)定方法，使其能夠?qū)︼暳咸砑觿┲屑~甜含量進(jìn)行精 準(zhǔn)定量，且具有無需進(jìn)行復(fù)雜的前處理、檢測(cè)靈敏、高效、準(zhǔn)確和穩(wěn)定的特點(diǎn)。

為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：一種飼料添加劑中紐甜含量 的高效液相色譜測(cè)定方法，包括如下步驟：

1)配制梯度濃度的紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液；所述紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液以水作為溶劑；

2)采用液相色譜法對(duì)步驟1)配制的紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算得到紐甜出峰的 峰面積，以紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；其中，色譜條件 為采用C₁₈液相色譜柱，檢測(cè)波長(zhǎng)210nm，流動(dòng)相為pH3.5～4.0的庚烷磺酸鈉、三乙胺和乙腈 的混合水溶液，庚烷磺酸鈉、三乙胺、乙腈和水的質(zhì)量體積比為2.6～3.4g：3～4.5mL：300～ 450mL：500-650mL；

3)將飼料添加劑加入水中，并進(jìn)行超聲處理，得到樣品處理液；

4)將步驟3)得到的樣品處理液在與步驟2)相同的液相色譜條件下進(jìn)行檢測(cè)，計(jì)算 得到紐甜出峰的峰面積，根據(jù)步驟2)建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品處理液中紐甜的濃度，并 結(jié)合所述樣品處理液的體積和樣品重量，計(jì)算出所述飼料添加劑中紐甜的含量。

相比現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有如下有益效果：

1、飼料添加劑中紐甜含量較少，針對(duì)現(xiàn)有的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)僅適用于大濃度下紐甜含量 的檢測(cè)，而并不適用于飼料添加劑中紐甜含量的檢測(cè)，且前處理方法過于繁瑣等不足之處， 本發(fā)明考慮到紐甜的特性，并根據(jù)飼料添加劑樣品中各成分組成的性質(zhì)，選擇C₁₈柱作為固 定相，并通過創(chuàng)造性的研究得出適用于本發(fā)明飼料添加劑分離的色譜條件，使得各成分在 該色譜條件下能充分分離開，在檢測(cè)波長(zhǎng)210nm條件下紐甜能夠穩(wěn)定出峰，相較于現(xiàn)有技術(shù) 更短時(shí)間內(nèi)即可出峰，出峰不會(huì)拖尾、重疊，不會(huì)有干擾峰出現(xiàn)，進(jìn)而使本發(fā)明檢測(cè)結(jié)果精 確，可靠性高。

2、本發(fā)明先對(duì)不同濃度的紐甜標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行檢測(cè)，避免了單點(diǎn)計(jì)算帶來的誤差， 進(jìn)而使檢測(cè)結(jié)果更加準(zhǔn)確、可靠，制得的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)更高，為后續(xù)樣品的檢測(cè)奠定了 可靠的定量基礎(chǔ)。