[發(fā)明專利]扁桃斑鳩菊的組培快繁育苗方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610107112.6
• 申請(qǐng)日: 2016-02-26
• 公開（公告）號(hào): CN105660411B
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王華宇;陳乃明;楊利平;陳麗文;何貴整;時(shí)群;梁剛;蔡林;陳乃健;吳紅英;呂月保
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 欽州市林業(yè)科學(xué)研究所
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 桂林市持衡專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司45107
• 代理人: 湯凌志

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及扁桃斑鳩菊的組培快繁育苗方法。

背景技術(shù)

扁桃斑鳩菊(Vernonia amygdalina Del.)又名桃葉斑鳩菊、杏葉斑鳩菊、神奇樹、苦樹、南非樹、南非葉，為菊科斑鳩菊屬植物，原產(chǎn)于非洲。扁桃斑鳩菊葉子可以安全食用，在尼日利亞等地被當(dāng)作一種蔬菜。其葉片具有獨(dú)特的氣味和苦澀感，因而常被稱為苦葉，可入藥，在治療腫瘤尤其是防治乳腺癌、降血壓方面極具潛力。

扁桃斑鳩菊在東南亞及臺(tái)灣等地民間應(yīng)用較多，而中國(guó)大陸則相對(duì)比較陌生，近年來(lái)兩廣地區(qū)陸續(xù)有引進(jìn)，但母本數(shù)量和相關(guān)應(yīng)用研究較少。采用組織培養(yǎng)技術(shù)建立其無(wú)性快繁技術(shù)體系，可以提高其繁殖系數(shù)、實(shí)現(xiàn)周年生產(chǎn)、保障種苗的品質(zhì)，并且有利于種質(zhì)資源保存，加快推進(jìn)其產(chǎn)業(yè)化和標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，也為更深層次的研究提供了技術(shù)平臺(tái)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種扁桃斑鳩菊的組培快繁育苗方法，該方法具有種苗繁殖速度快、生產(chǎn)不受季節(jié)影響、移栽成活率高、種苗一致性好等優(yōu)點(diǎn)，為扁桃斑鳩菊的規(guī)?；蜆?biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)提供了工藝方法。

本發(fā)明所述的扁桃斑鳩菊的組培快繁育苗方法，包括以下步驟：

1)外植體采集：采集幼嫩的莖段，去除葉片，清水沖洗后作為外植體備用；

2)外植體消毒：對(duì)步驟1)得到的外植體進(jìn)行浸泡消毒，并用無(wú)菌水沖洗；

3)初代培養(yǎng)：將步驟2)得到的消毒處理好的外植體接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；

4)繼代培養(yǎng)：將步驟3)誘導(dǎo)培養(yǎng)基中形成的不定芽分離切割，轉(zhuǎn)接入繼代培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；

5)生根培養(yǎng)：選取步驟4)得到的生長(zhǎng)健壯的增殖苗轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)；

6)移栽：待根系發(fā)育完成并煉苗后，洗去基部培養(yǎng)基，移栽入輕基質(zhì)中。

本發(fā)明步驟1)所述的采集幼嫩的莖段，是指選取生長(zhǎng)健壯、無(wú)病蟲害的優(yōu)良植株，剪取木質(zhì)化程度較輕的當(dāng)年生嫩枝為外植體。

步驟2)所述的外植體消毒，優(yōu)選將步驟1)得到的外植體截成長(zhǎng)1.2-1.5cm的帶節(jié)小段，剪去葉片，只保留葉柄基部(長(zhǎng)約0.5cm)，流水沖洗20min備用；在超凈工作臺(tái)上，用75％(v/v)酒精浸泡10s，0.1％升汞溶液振蕩消毒8min，再用無(wú)菌水沖洗5次洗去殘留藥液，用無(wú)菌濾紙吸干水分后，切去莖段兩端和葉柄上部少許(保留長(zhǎng)度約0.2cm)，備用。

步驟3)所述的初代培養(yǎng)，即誘導(dǎo)無(wú)菌芽，在超凈工作臺(tái)上將步驟2)得到的外植體莖段接種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS基本培養(yǎng)基附加6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)0.5mg/L和萘乙酸(NAA)0.05mg/L，即MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L，蔗糖和瓊脂粉添加量分別為每L培養(yǎng)基30g、6g，滅菌前培養(yǎng)基pH調(diào)整為6.0，培養(yǎng)室溫度為(23±2)℃，光照強(qiáng)度1500-2500lx，光照時(shí)間為12h/d。

在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，側(cè)芽易于誘導(dǎo)且生長(zhǎng)迅速，誘導(dǎo)率可達(dá)70％，以春夏季消毒效果更佳；初代培養(yǎng)3周時(shí)，側(cè)芽可高達(dá)3-4cm，具3張以上葉片，可轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)。

步驟4)所述的繼代培養(yǎng)，待無(wú)菌芽生長(zhǎng)至3-4cm時(shí)，將其分段切割，逐段轉(zhuǎn)入繼代培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，每3周左右繼代轉(zhuǎn)接一次；培養(yǎng)室光照時(shí)間為16h/d，其他培養(yǎng)條件同初代培養(yǎng)；

繼代培養(yǎng)基為MS-z+6-BA0.2mg/L+IBA0.05mg/L+PP333(多效唑)0.05mg/L，所述的MS-z培養(yǎng)基每升中所含的組分及濃度(mg/L)如下：

大量元素：硝酸鉀1900、硝酸銨412.5、二水氯化鈣880、七水硫酸鎂370、磷酸二氫鉀170、七水硫酸亞鐵27.8、乙二胺四乙酸二鈉37.3；

微量元素：四水硫酸錳22.3、七水硫酸鋅8.6、硼酸3.1、二水鉬酸鈉0.25、碘化鉀0.83、五水硫酸銅0.025、六水氯化鈷0.025；

有機(jī)物：肌醇100.0、甘氨酸2.0、鹽酸吡哆醇(VB6)0.5、煙酸0.5、鹽酸硫胺素(VB1)0.1；

其它：瓊脂8000、蔗糖40000、pH 6.0；

扁桃斑鳩菊每個(gè)繼代周期增殖系數(shù)可達(dá)4.0，且試管苗生長(zhǎng)較快，培養(yǎng)時(shí)間超過4周即易出現(xiàn)黃葉和小芽死亡的情況，影響增殖效率。試管苗對(duì)激素較為敏感，6-BA濃度超過0.3mg/L時(shí)容易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象，當(dāng)濃度達(dá)到0.5mg/L時(shí)，玻璃化現(xiàn)象尤為嚴(yán)重，因此培養(yǎng)過程中需嚴(yán)格控制激素濃度。光照強(qiáng)度為1500-2500lx時(shí)，光照時(shí)間優(yōu)選16h。