[發(fā)明專利]雷公藤甲素作為特征識(shí)別物在鑒別蜂蜜中是否含有雷公藤蜂蜜中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610105513.8
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號(hào): CN105758948B
• 公開（公告）日: 2018-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 薛曉鋒;吳黎明;曹葳蕤;杜冰;張中印;趙柳微;王妙;韓麗妲
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蜜蜂研究所
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11002
• 代理人: 郝瑞剛

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及蜂蜜鑒別技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及雷公藤甲素作為特征識(shí)別物在鑒別蜂蜜中是否含有雷公藤蜂蜜中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露后與自身分泌物混合經(jīng)充分釀造而成的天然甜物質(zhì)。蜜蜂采集的植物花蜜、分泌物或蜜露應(yīng)安全無毒，不得來源于有毒蜜源植物，如雷公藤、博落回、狼毒等。

蜂蜜中毒事件時(shí)有發(fā)生，在國外來自馬桑和杜鵑花的“野蜂蜜”中毒事件時(shí)有報(bào)道，國外也建立了對應(yīng)的分析方法來對這種蜂蜜進(jìn)行確認(rèn)檢驗(yàn)。在我國，蜂蜜中毒很少發(fā)生，但是近幾年在我國福建、湖北、重慶等地出現(xiàn)了蜜蜂中毒死亡事件，通過花粉初步認(rèn)定為雷公藤和博落回形成的有毒蜂蜜。盡管蜜蜂很少去采集雷公藤和博落回這兩種有毒蜂蜜，但是在大旱之季，或其他蜜源減少，雷公藤和博落回大量產(chǎn)粉和流蜜時(shí)，蜜蜂會(huì)采集雷公藤和博落回的花蜜，生產(chǎn)有毒蜂蜜。加之我國蜂蜜的生產(chǎn)方式，這些蜂蜜有可能混到以其他蜂蜜中后加工，造成潛在風(fēng)險(xiǎn)。

盡管目前還沒有明確這種蜂蜜中到底是哪種或是那類物質(zhì)導(dǎo)致的中毒，但是首先建立起識(shí)別這種蜂蜜的方法，對于蜂蜜的消費(fèi)安全有著重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷和不足，篩選出易發(fā)現(xiàn)、易制備的物質(zhì)作為特征識(shí)別物來鑒別蜂蜜中是否含有有毒的雷公藤蜂蜜，并利用該特征識(shí)別物建立起一種鑒別雷公藤蜂蜜的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案之一是：雷公藤甲素作為特征識(shí)別物在鑒別蜂蜜中是否含有雷公藤蜂蜜中的應(yīng)用。

本發(fā)明的技術(shù)方案之二是：一種利用雷公藤甲素作為特征識(shí)別物鑒別蜂蜜中是否含有雷公藤蜂蜜的方法，該方法采用LC-Q-TOF(液相-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜)或LC/MS/MS(液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜)檢測待測蜂蜜樣品，所得譜圖中含有所述雷公藤甲素對應(yīng)的特征峰時(shí)，則判定蜂蜜中含有有雷公藤蜂蜜；不含有所述特征峰時(shí)，判定蜂蜜中不含有雷公藤蜂蜜。

其中，所述LC-Q-TOF的飛行時(shí)間質(zhì)譜圖中至少含有361.1646(允許偏差±5ppm)質(zhì)量數(shù)(M+H)準(zhǔn)分子離子峰。

優(yōu)選地，為了提高鑒別的精準(zhǔn)度，所述飛行時(shí)間質(zhì)譜圖中還含有如下質(zhì)量數(shù)(M+H)準(zhǔn)分子離子峰中的一個(gè)或多個(gè)：359.1624(允許偏差±5ppm)，307.1820(允許偏差±5ppm)，385.1718(允許偏差±5ppm)，327.1720(允許偏差±5ppm)，355.2032(允許偏差±5ppm)，371.1893(允許偏差±5ppm)，339.2081(允許偏差±5ppm)。

更優(yōu)選地，所述飛行時(shí)間質(zhì)譜圖中同時(shí)含有上述7個(gè)分子離子峰。

具體地，在對蜂蜜樣品進(jìn)行檢測時(shí)，優(yōu)選采用如下預(yù)處理方式對蜂蜜樣品進(jìn)行預(yù)處理：取蜂蜜樣品，每1g蜂蜜中加入0.8-1.2mL水溶解，向溶解液中加入0％-0.3％的甲酸乙腈溶液或甲酸甲醇溶液斡旋提取1-8min，加入無水硫酸鎂和氯化鈉后離心，取有機(jī)相并用氮?dú)獯蹈桑缓蠹尤?0％-60％的乙腈水溶液或甲醇水溶液復(fù)溶，過濾即得。

優(yōu)選的預(yù)處理方法為：取蜂蜜樣品，每1g蜂蜜中加入1mL水溶解，向溶解液中加入0％-0.2％的甲酸乙腈溶液或甲酸甲醇溶液斡旋提取5min，加入無水硫酸鎂和氯化鈉后離心，取有機(jī)相并用氮?dú)獯蹈桑缓蠹尤?0％的乙腈水溶液或甲醇水溶液復(fù)溶，過濾即得。

其中，0％-0.3％或0％-0.2％的甲酸乙腈溶液(或甲酸甲醇溶液)指的是乙腈溶液(或甲醇溶液)中甲酸的體積百分含量。40％-60％或50％的乙腈水溶液(或甲醇水溶液)指的是水溶液中乙腈(或甲醇)的體積百分含量。

采用LC-Q-TOF對蜂蜜樣品進(jìn)行檢測時(shí)，所述LC-Q-TOF中的LC包括如下檢測條件：

色譜柱：C18柱或C8柱或苯基柱；

流動(dòng)相：A乙腈或甲醇，B 0％-0.2％的甲酸水溶液，梯度洗脫：0-2min 5％B，2-20min 90％B，20-21min 5％B，21-35min 5％B；

所述Q-TOF包括如下檢測條件：

目標(biāo)離子：361.1646；

碰撞能量30eV。

其中，流動(dòng)相B 0％-0.2％的甲酸水溶液指的是甲酸水溶液中甲酸的體積百分含量。

優(yōu)選地，色譜柱采用C18柱，進(jìn)一步優(yōu)選采用Eclipse Plus C18，2.1x100mm，1.8μm。

為了進(jìn)一步提高檢測的精準(zhǔn)度，LC的流動(dòng)相流速為0.15-0.6mL/min，柱溫為25-35℃，進(jìn)樣量為1-30μL。

優(yōu)選地，流速為0.2mL/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為2μL。