[發(fā)明專利]一種水線草中雞矢藤苷甲酯的提取分離方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610105418.8
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號: CN105713056A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林麗美;廖端芳;夏伯候
• 申請（專利權(quán)）人: 湖南中醫(yī)藥大學
• 主分類號: C07H17/04
• 分類號: C07H17/04;C07H1/08
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥提取分離技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種水線草中雞矢藤苷甲酯 的提取分離方法。

背景技術(shù)

腫瘤是嚴重威脅人類生命的的重大疾病。據(jù)統(tǒng)計，惡性腫瘤已成為城鄉(xiāng)居 民的首要死因，而且呈現(xiàn)年輕化合逐年上升趨勢，全國癌癥的平均5年存活率僅 為25％左右，可見腫瘤的預(yù)防和治療十分迫切。藥物治療是腫瘤的主要治療手段， 雖然目前已經(jīng)開發(fā)了數(shù)十種抗腫瘤藥物，有效延長了患者生命或者提高了患者 生存質(zhì)量，但是腫瘤的藥物研究還是面臨著巨大挑戰(zhàn)，抗癌藥物多有細胞毒藥 物，副作用多；而中藥有幾千年的人體毒性實驗的基礎(chǔ)，從天然產(chǎn)物中尋找高 效低毒的抗腫瘤活性化合物一直是研究熱點。

水線草，又名傘房花耳草，為茜草科一年生草本植物，耳草屬植物水線草 Hedyotiscorymbosa(L.)的干燥全草。苦、寒，入肺、大腸二經(jīng)；具有清熱解毒 之功效，常用于燙傷，與常山、馬鞭草混合煎服能治瘧疾。目前臨床上，水線 草的主要用途是與白花蛇舌草混用治療癌癥(南京新醫(yī)學院.中藥大辭典.上海. 上海科學技術(shù)出版社,1977:535.)，但其抗腫瘤物質(zhì)基礎(chǔ)尚不明確。

水線草中主含的化學成分為環(huán)烯醚萜及其苷類和三萜酸類化合物。雞矢藤 苷甲酯(又稱雞屎藤苷甲酯)為環(huán)烯醚萜類化合物，是從水線草中分離得到的。 早在1988年，就有研究表明雞矢藤苷甲酯及其相關(guān)衍生物具有抗腫瘤和抗氧化 活性。(Ishiguro,Kyoko；Yamaki,Masae；Takagi,Shuzo；Ikeda,Yoshiaki；Kawakami, Kiyotaka；Ito,Keizo；Nose,TakashiStudiesoniridoid-relatedcompounds.V. Antitumoractivityofiridoidderivativesperiodateoxidationproducts.Journalof Pharmacobio-Dynamics(1988),11(2),131-6.)。

目前尚未檢索到水線草中雞矢藤苷甲酯提取分離方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種水線草中雞矢藤苷甲酯的提取分離方法。

為實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種水線草中雞矢藤苷甲酯的提取分離方法，包括以下步驟：

1)將水線草用醇溶劑進行提取，得到水線草醇提物；

2)將所得水線草醇提物分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取；取正 丁醇萃取部位，濃縮得精提浸膏；

3)將所述精提浸膏用甲醇超聲溶解，過濾，濾液硅膠拌樣后經(jīng)正相硅膠柱 層析，用洗脫劑進行梯度洗脫，收集洗脫液；所述洗脫劑為氯仿-甲醇洗脫劑， 和/或二氯甲烷-甲醇洗脫劑；

4)將步驟3)所述洗脫液采用柱層析分離法或制備液相分離法進一步純化， 制得雞矢藤苷甲酯；

所述柱層析分離法包括將步驟3)所得洗脫液采用葡聚糖凝膠柱層析，以氯 仿-甲醇作為洗脫劑；收集洗脫液后經(jīng)ODS反相柱層析，以甲醇溶液等度洗脫或 者梯度洗脫，收集洗脫液，制得雞矢藤苷甲酯；

所述制備液相分離法包括將步驟3)所得洗脫液進制備液相，以甲醇水為流 動相進行洗脫，制得雞矢藤苷甲酯；所述制備液相采用LC-3000高效液相Thermo C18(250*21.2mm)制備柱。

上述水線草中雞矢藤苷甲酯的提取分離方法，其中：

步驟1)中優(yōu)選先將水線草粉碎再進行提取，優(yōu)選為60-80目；所述提取溫度 優(yōu)選為60-80℃；所述醇溶劑為乙醇或甲醇溶劑，優(yōu)選為甲醇溶劑；所述醇溶劑 的濃度為50％-70％(質(zhì)量濃度)，優(yōu)選70％(質(zhì)量濃度)；更優(yōu)選為70％的甲醇 (質(zhì)量濃度)；所述提取方法為回流提取、超聲提取、浸漬提取等方法中的一 種或幾種；優(yōu)選為回流提取；所述醇溶劑的用量為水仙草重量的8-15倍，優(yōu)選為 10倍。

為盡量將水仙草中雞矢藤甲酯提取出來，步驟1)優(yōu)選包括將水線草粉碎至 60-80目，加入8-15倍重量的70％甲醇(質(zhì)量濃度)，攪勻，先超聲提取0.5-1h， 然后回流提取1-3h，提取溫度為60-80℃；過濾；濾渣按上述方法再次進行超聲 提取、回流提取；共提取三次，合并濾液，減壓濃縮得到水線草醇提物(即粗 提浸膏)。