[發明專利]一種水線草中雞矢藤苷甲酯的提取分離方法

在審

• 申請號: 201610105418.8
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號: CN105713056A
• 公開（公告）日: 2016-06-29
• 發明（設計）人: 林麗美;廖端芳;夏伯候
• 申請（專利權）人: 湖南中醫藥大學
• 主分類號: C07H17/04
• 分類號: C07H17/04;C07H1/08
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種水線草中雞矢藤苷甲酯的提取分離方法，其特征在于，包括以下步 驟：

1)將水線草用醇溶劑進行提取，得到水線草醇提物；

2)將所得水線草醇提物分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃??；取正 丁醇萃取部位，濃縮得精提浸膏；

3)將所述精提浸膏用甲醇超聲溶解，過濾，濾液硅膠拌樣后經正相硅膠柱 層析，用洗脫劑進行梯度洗脫，收集洗脫液；所述洗脫劑為氯仿-甲醇洗脫劑， 和/或二氯甲烷-甲醇洗脫劑；

4)將步驟3)所述洗脫液采用柱層析分離法或制備液相分離法進一步純化， 制得雞矢藤苷甲酯；

所述柱層析分離法包括將步驟3)所得洗脫液采用葡聚糖凝膠柱層析，以氯 仿-甲醇為洗脫劑；收集洗脫液后經ODS反相柱層析，以甲醇溶液等度洗脫或者 梯度洗脫，收集洗脫液，制得雞矢藤苷甲酯；

所述制備液相分離法包括將步驟3)所得洗脫液進制備液相，以甲醇水為流 動相進行洗脫，收集洗脫液，制得雞矢藤苷甲酯；所述制備液相采用LC-3000高 效液相ThermoC18，(250*21.2mm)制備柱柱。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟1)包括將水線草粉 碎至60-80目，加入8-15倍重量的70％甲醇，攪勻，先超聲提取0.5-1h，然后回流 提取1-3h，提取溫度為60-80℃；過濾；濾渣按上述方法再次進行超聲提取、回 流提??；共提取三次，合并濾液，減壓濃縮，得到水線草醇提物。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟2)所述石油醚萃取 為將步驟1)所得水線草醇提物用石油醚萃取3-5次，所述水線草醇提物與石油醚 的重量比例為1-3∶4-6；萃取后保留水部位；

所述乙酸乙酯萃取為將石油醚萃取后所述水部位用乙酸乙酯萃取3-5次，石 油醚萃取后所述水部位與乙酸乙酯的重量比例為1-3∶4-6；萃取后保留水部位；

所述正丁醇萃取為將乙酸乙酯萃取后所述水部位用正丁醇萃取3-5次，乙酸 乙酯萃取后所述水部位與正丁醇的重量比例為1-3∶4-6；萃取后保留正丁醇萃取 部位。

4.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟3)將所述精提浸膏 用3-5倍重量的甲醇超聲溶解，再進行過濾。

5.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟3)所述梯度洗脫包 括以氯仿-甲醇為洗脫劑，分別以氯仿:甲醇體積比為7:1，5:1，3:1進行第一次梯 度洗脫，收集氯仿:甲醇為7:1的洗脫液；再以氯仿-甲醇為洗脫劑，分別以氯仿: 甲醇體積比為12:1，9:1，7:1，5:1，3:1進行第二次梯度洗脫，收集氯仿:甲醇為 7:1的洗脫液；或者以二氯甲烷-甲醇為洗脫劑，分別以二氯甲烷:甲醇體積比為 12:1，9:1，7:1，5:1，3:1進行第二次梯度洗脫，收集二氯甲烷:甲醇為7:1的洗脫 液，制得雞矢藤苷甲酯。

6.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟3)采用100-200目正 相硅膠柱層析。

7.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟4)所述葡聚糖凝膠 柱層析，以氯仿:甲醇體積比60:40為洗脫劑進行洗脫；所述ODS反相柱層析，以 30％甲醇溶液進行等度洗脫或者以20-50％甲醇溶液進行梯度洗脫。

8.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟4)所述制備液相分 離法先將步驟3)所得洗脫液經0.22μm微孔濾膜過濾，再取濾液進制備液相。

9.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟4)所述制備液相分離法 中所述洗脫劑為25％甲醇水。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將水線草粉碎至60-80目，加入8-15倍重量的70％甲醇，攪勻，先超聲 提取0.5-1h，然后回流提取1-3h，提取溫度為60-80℃；過濾；濾渣按上述方法 再次進行超聲提取、回流提?。还蔡崛∪?，合并濾液，減壓濃縮，得到水線 草醇提物；

2)將所得水線草醇提物分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取；取正 丁醇萃取部位，濃縮得精提浸膏；

所述石油醚萃取為將步驟1)所得水線草醇提物用石油醚萃取3-5次，所述水 線草醇提物與石油醚的重量比例為1-3∶4-6；萃取后保留水部位；

所述乙酸乙酯萃取為將石油醚萃取后所述水部位用乙酸乙酯萃取3-5次，石 油醚萃取后所述水部位與乙酸乙酯的重量比例為1-3∶4-6；萃取后保留水部位；

所述正丁醇萃取為將乙酸乙酯萃取后所述水部位用正丁醇萃取3-5次，乙酸 乙酯萃取后所述水部位與正丁醇的重量比例為1-3∶4-6；萃取后保留正丁醇萃取 部位；

3)將所述精提浸膏用3-5倍重量的甲醇超聲溶解，過濾，濾液硅膠拌樣后經 100-200目正相硅膠柱層析，用洗脫劑進行梯度洗脫，收集洗脫液；

具體地，所述梯度洗脫以氯仿-甲醇為洗脫劑，分別以氯仿:甲醇體積比為7:1， 5:1，3:1進行第一次梯度洗脫，收集氯仿:甲醇為7:1的洗脫液；再以氯仿-甲醇為 洗脫劑，分別以氯仿:甲醇體積比為12:1，9:1，7:1，5:1，3:1進行第二次梯度洗 脫，收集氯仿:甲醇為7:1的洗脫液；或者以二氯甲烷-甲醇為洗脫劑，分別以二氯 甲烷:甲醇體積比為12:1，9:1，7:1，5:1，3:1進行第二次梯度洗脫，收集二氯甲 烷:甲醇為7:1的洗脫液；

4)將步驟3)所述第二次梯度洗脫液采用柱層析分離法或制備液相分離法 進行進一步純化，制得雞矢藤苷甲酯；

所述柱層析分離法包括將步驟3)所得第二次梯度洗脫液采用葡聚糖凝膠柱 層析，用氯仿:甲醇體積比為60:40的洗脫劑進行洗脫；收集洗脫液后經ODS反相 柱層析，用30％甲醇溶液等度洗脫或者20-50％甲醇溶液梯度洗脫，收集洗脫液， 制得雞矢藤苷甲酯；

所述制備液相分離法包括將步驟3)所得第二次梯度洗脫液經0.22μm微孔 濾膜過濾，取濾液進制備液相，以25％甲醇水為洗脫劑等度洗脫，收集洗脫液， 制得雞矢藤苷甲酯。