[發明專利]一種磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201610104825.7
• 申請日: 2016-02-25
• 公開（公告）號: CN105759051B
• 公開（公告）日: 2018-12-18
• 發明（設計）人: 梁敏瑤
• 申請（專利權）人: 廣州科方生物技術股份有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種磷脂酰肌醇蛋白聚糖?3的定量分析試劑盒，包括GPC3標準品、吖啶酯標記的磷脂酰肌醇蛋白聚糖?3抗體溶液、偶聯有磷脂酰肌醇蛋白聚糖?3抗體的納米磁微球溶液。本發明還提供了該試劑盒的制作方法。本發明以吖啶酯為發光標記物的GPC3納米磁微球化學發光免疫分析測定試劑盒，不僅具有靈敏度高、線性范圍寬、特異性好、標記物穩定、成本低等特點，而且其檢測程序亦簡便、快速，只需微量樣本即可檢測。

技術領域

本發明涉及一種檢測試劑盒，尤其涉及一種GPC3檢測的試劑盒。

背景技術

磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3，GPC3)是一種硫酸肝素類蛋白多糖，由蛋白質、脂質和糖三者共價連接的復雜糖復合物。GPC3在胚胎及胎兒期組織器官的形成和發育階段扮演著重要角色，主要起負性調控作用，防止組織器官生長過大并在整體上調節身體大小；肝實質細胞在整個胎兒期均有明顯表達，在成人肝臟不表達，而肝癌發生早期即可被再激活而高表達，在良性肝病(肝炎，脂肪肝)、肝硬化和肝膽管癌中GPC3不表達或呈低表達，因此血清中可溶性GPC3可作為原發性肝癌的特異性標志物，在肝癌的鑒別診斷中發揮作用。

目前所用檢測GPC3的化學發光分析法主要是酶催化化學發光分析法，其是以酶標記待檢物特異性結合物，形成待檢物和酶的復合物，然后以酶再作用于發光底物，在信號試劑作用下發光，用發光信號測定儀進行發光測定。由于酶催化化學發光分析法受到酶和發光底物的限制導致其背景發光增強、測量成本高等，從而限制了這一方法的靈敏度和它的應用。因此需要一種能夠快速、準確、成本低的檢測GPC3的試劑盒來滿足檢測的需求。

發明內容

為了有效的解決上述提出的技術問題，本發明提供了一種磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析試劑盒及其制備方法。

一種磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析試劑盒

(1)GPC3標準品，所述GPC3為磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3；

(2)吖啶酯標記的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗體溶液；

(3)偶聯有磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗體的納米磁微球溶液。

優選地，所述GPC3標準品為溶液狀態，濃度分別為：0ng/mL、0.5ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、20.0ng/mL、100.0ng/mL。

優選地，所述試劑盒還包括發光液，所述發光液為H₂O₂溶液。

優選地，所述偶聯有磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗體納米磁微球溶液中的納米磁微球為直徑為3μm、表面帶羧基的超順磁性的納米磁微球。

本發明還包括一種磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3的定量分析試劑盒的制備方法，包括如下步驟：

(1)GPC3標準品的制備：用標準品緩沖液將GPC3配制成階梯濃度的GPC3溶液，所述標準品緩沖液包括質量比為1～5％BSA、0.5～1.0％NaCl、0.05～0.1％TritonX-100或Tween20、0.05～0.1％ProClin 300和余量的磷酸緩沖液；所述磷酸緩沖液濃度為0.1～0.2mol/L；

(2)吖啶酯標記的磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗體溶液的制備：

a、取GPC3抗體溶于，pH為6.8～7.3濃度為0.2mol/L的磷酸緩沖液中，至終濃度為2～8mg/L；

b、向步驟a處理后的GPC3抗體溶液加入吖啶酯至吖啶酯終濃度為0.1～0.5mg/L，避光靜置8～16小時，收集標記有吖啶酯的GPC3抗體溶液；

(3)偶聯有磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗體的納米磁微球溶液的制備：